[发明专利]一种大西洋鲑和虹鳟的质谱鉴别方法

说明书

本发明公开了一种大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的质谱鉴别方法，包括如下步骤：a)获取大西洋鲑的氨基酸序列；b)获取虹鳟的氨基酸序列；c)利用特异性的酶解方法将待检测蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用静电场轨道阱高分辨质谱全扫描模式检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，并与前面获取的氨基酸序列进行比对，定性判断是否存在大西洋鲑和虹鳟的特征肽段；d)挑选定性为大西洋鲑或虹鳟的特征肽段，利用串联四级杆质谱建立多反应监测方法进行定量分析。本发明利用蛋白质特征肽段鉴别，能够同时实现大西洋鲑和虹鳟的定性鉴定和掺假定量研究，最低检出限可达1％，灵敏度高，准确度高，抗干扰能力强，可广泛应用于大西洋鲑的真伪鉴别。

技术领域

本发明涉及一种蛋白质质谱检测方法，尤其涉及一种大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的质谱鉴别方法。

背景技术

海产品的真假和来源评估是食品评估鉴定中重要的组成部分。许多鱼类食品被标上错误标签，甚至有劣质鱼肉、假冒鱼肉被贴上优质鱼肉的标签，这严重影响了市场透明度，损害了消费者的健康。日前，中国水产流通与加工协会和三文鱼分会成员单位共同通过三文鱼的鉴定标准，将三文鱼定为鲑科鱼类的统称，大西洋鲑和虹鳟同为三文鱼的一种。这引发了业界的广泛关注和消费者的质疑。

虽然大西洋鲑和虹鳟同属鲑科鱼类，但大西洋鲑是国际上流行的名贵食用鱼类，其含有2.7％的ω-3脂肪酸(EPA、DPA和DHA)，能有效的降低人体的胆固醇含量，从而预防心血管疾病的发生。大西洋鲑体内更富含抗氧化物质虾青素，虾青素在高温下极易氧化，只有生食才能保证大西洋鲑中的虾青素不被破坏，因此生食大西洋鲑一直是消费者热爱的食用方法。大西洋鲑多依赖进口，价格高昂，并且其肉色难辨，因此，国内市场上出现了以淡水虹鳟鱼冒充大西洋鲑的现象。许多消费者所认为的三文鱼是大西洋鲑这类的海水鱼而不是虹鳟这类的淡水鱼。虽然海水鱼和淡水鱼普遍都会携带有寄生虫，但其区别在于渗透压等因素。海水的渗透压高，与人类体内环境不同，因此海水鱼所携带的寄生虫多数情况下无法在人体内长时间存活及利用人体来完成生命周期。只要处理得当，生食海水鱼感染寄生虫的风险相对较低。而淡水鱼携带寄生虫成长环境与人体内环境类似，它们能在人体内长时间寄存且危害较大。我国内市场内大约有三分之一的“三文鱼”实际产自青藏高原等内陆淡水湖。商家为降低成本，以次充好，用国产虹鳟鱼冒充大西洋鲑的行为严重危害了消费着的健康。而此次中国水产协会将大西洋鲑和淡水虹鳟同定义为“三文鱼”的行为再次将三文鱼的鉴别引入公众视线。

大西洋鲑和虹鳟鱼因为颜色和纹理较为相似，人类肉眼难以分辨。如何能确保消费者购买到的贵价三文鱼确实是大西洋鲑呢。目前，三文鱼的鉴别技术有近红外光谱技术和PCR-RFLP、AFLP、DNA条形码、荧光实时定量PCR等分子生物技术。PCR-RFLP和AFLP所用试剂对人体有害切操作步骤极为繁琐，用时较长。而荧光实时定量PCR鉴别物种虽然快速准确，但是成本较高。随着三文鱼销量的走高，进口三文鱼(大西洋鲑)的缺口进一步加大，利用虹鳟等淡水鱼冒充三文鱼的行为也逐渐增多。为保证消费者的知情权和身体健康，有必要一种新型的基于蛋白质组学的质谱检测方法，确定大西洋鲑和虹鳟的特征肽段，建立多反应监测方法进行定性和定量分析。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的质谱鉴别方法，灵敏度高，准确度高，抗干扰能力强，可广泛应用于大西洋鲑掺假的确证和检测。

本发明为解决上述技术问题而采用的技术方案是提供一种大西洋鲑鱼和虹鳟鱼的质谱鉴别方法，包括如下步骤：a)获取大西洋鲑和虹鳟的氨基酸序列并保存；b)利用特异性的酶解方法将待检测蛋白质切成小分子量的多肽片段混合物，利用静电场轨道阱高分辨质谱全扫描模式检测混合物中各多肽的分子量和碎片信息，并与步骤a)和b)中的氨基酸序列进行比对，实现蛋白质和多肽的鉴定；c)通过基本局部比对搜索工具与Uniprot数据库对比分析，筛选出大西洋鲑和虹鳟的特征肽段；d)利用三重四极杆质谱对大西洋鲑和虹鳟的特征肽段进行验证，并建立多反应监测方法进行掺假定量分析。