[发明专利]一种鸭坦布苏病毒的ELISA抗体检测试剂盒及其应用

说明书

本发明公开了一种鸭坦布苏病毒的ELISA抗体检测试剂盒及其应用。所述试剂盒中包括鸭坦布病毒E蛋白重组融合特异性抗原表位蛋白包被的ELISA板，所述的重组融合特异性抗原表位蛋白是由SEQ ID NO.1所示的鸭坦布苏病毒E蛋白的特异性抗原表位蛋白与SEQ ID NO.2所示的鸭坦布苏病毒E蛋白的特异性抗原表位蛋白通过柔性肽连接后得到。本发明利用鸭坦布苏病毒E蛋白特异性的抗原表位串联成融合抗原，特异性强，仅对DTMUV阳性血清具有敏感性，对鸭其他种类疾病阳性血清如(DHV‑I，DEV，MDPV)以及DENV、JEV、WNV、ZIKV等阳性血清不具有敏感性。此外，使用本发明的试剂盒检测DTMUV简单易行且安全性高，包被抗原为抗原表位串联肽段，相对于E蛋白更易于获得，且相对于全病毒包被方法安全性更高。

技术领域

本发明涉及一种鸭坦布苏病的ELISA抗体检测试剂盒及其应用，本发明属于免疫学技术领域。

背景技术

鸭坦布苏病毒病是由鸭坦布苏病毒(Duck tembusu virus,DTMUV)引起的一种急性传染病，该病于2010年在我国南方地区首次爆发，随后疾病迅速传播危害到全国各地的鸭养殖场，造成了巨大经济损失。目前针对鸭坦布苏病毒病的诊断方法主要存在两种，第一种是分子生物学诊断方法，它的基本原理是根据病毒核酸序列设计出特异性的扩增引物，以反转录得到病毒的cDNA为模板利用PCR技术扩增病毒核酸的目的片段，从而检测病毒的方法，第二种是血清学诊断方法，主要包活间接免疫荧光试验(Immunonuorescence assay,IFA)、酶联免疫吸附试验(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)，原理是利用抗体与病毒上相应的抗原部分结合后，再利用特定标记的二抗与已结合的抗体发生作用，通过荧光显微镜观察或读取OD值而推知抗原的存在。但是以上两种检测方法均存在不足之处：(1)分子生物学诊断方法对于实验的仪器要求较高，适合实验室进行病原的检测而不适用大规模的临床检测；(2)血清学诊断方法中，间接免疫荧光实验(IFA)对实验材料以及设施同样要求较高，因此一般也不用于临床检测，而ELISA诊断方法一般是常用的临床诊断方法，该方法简单、高效，可同时检测大规模的样品，但目前实验室建立的ELISA诊断方法以及商品化的试剂盒，大都选用纯化灭活的鸭坦布苏病毒或鸭坦布苏病毒E蛋白作为抗原进行包被，这些方法灵敏度高、敏感性较好，但存在最大一个问题就是交叉反应性，由于鸭坦布苏病毒属于黄病毒科黄病毒属，而黄病毒属各个病毒E蛋白间的同源性较高，因此无论是利用全病毒或是E蛋白建立的ELISA诊断方法都会与黄病毒属其他病毒产生交叉反应现象。

抗原表位(Epitope)又称抗原决定簇(Antigenic determinant,AD)是引起免疫应答的物质基础，能够与血清中的抗体发生特异性的结合，因此利用病毒蛋白特异性的抗原表位建立的血清学ELISA诊断方法，有其自身的优点和特殊性，即减少了无关干扰序列的影响，又增强其特异性。鸭坦布病毒E蛋白Epitope-ELISA诊断方法是一种特异性的检测方法，仅对DTMUV阳性血清具有敏感性，而对鸭其他种类疾病阳性血清(鸭肝炎、鸭瘟、番鸭细小)以及DENV、JEV、WNV、ZIKV等阳性血清不具有敏感性。

发明内容

本发明解决的技术问题是提供检测鸭坦布苏病毒抗体的ELISA诊断试剂盒。

本发明的目的在于根据现有的鸭坦布苏病毒病ELISA抗体检测方法中存在交叉反应性、特异性不强和检测结果缺乏准确性等问题，提供一种采用鸭坦布病毒E蛋白特异性抗原表位作为检测抗原的鸭坦布苏病毒ELISA抗体诊断试剂盒，该试剂盒具有种特异性强和免疫原性强的特点。

为了达到上述目的，本发明采用了以下技术手段：