[发明专利]一种细胞外泌体提取分离的方法

权利要求书

1.一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：包括以下操作步骤：

S1：细胞培养基上清:将目标细胞放入选定的培养基内，细胞培养后72h收获，离心获取细胞培养基上清；

S2：低速离心：将S1)中收获的细胞培养基上清使用低温离心机进行4℃，6000xg离心30min，离心完毕后将离心管内上清液转移至新管备用，沉淀丢弃；

S3：滤膜过滤：用一次性注射器吸取将S2)中获得的上清液，将上清液缓慢滴至规格为0.22um的细胞滤膜进行过滤；

S4：超速离心：将S3)中获得的细胞培养基放入超速离心机进行4℃，100000xg超速离心70min，离心完毕后去除上清保留沉淀部分；

S5：清洗重悬；使用PBS缓冲液将S4)中获得的沉淀进行清洗重悬；

S6：再次超速离心：将S5)中获得的液体再次放入超速离心机进行4℃，100000xg超速离心70min，离心完毕后小心吸出上清保留沉淀部分；

S7：重悬沉淀：使用PBS缓冲液将S6)中获得的沉淀进行重悬，即为所提取分离的外泌体产物。

2.根据权利要求1所述的一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：所述细胞培养基上清体积不少于30ml，细胞培养基上清内不含血清或使用不含外泌体的血清。

3.根据权利要求1所述的一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：S2)中沉淀包括细胞培养基内的死细胞以及大的细胞碎片成分，S4)中沉淀部分含有外泌体。

4.根据权利要求1所述的一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：S4)中进行超速离心前对所使用的超速离心管进行灭菌处理。

5.根据权利要求1所述的一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：S5)和S7)中所用PBS缓冲溶液为无菌中性溶液，且不含有不溶颗粒。

6.根据权利要求1所述的一种细胞外泌体提取分离的方法，其特征在于：S7)中所用PBS缓冲溶液使用体积为50ul，所得外泌体放置于-80℃冰箱内长期保存。