[发明专利]一株偏二甲肼降解菌株WP52及其应用

说明书

本发明涉及一株能够降解偏二甲肼的适冷假单胞菌(Pseudomonas extremaustralis)WP52，属于微生物技术领域。该菌株已于2018年6月11日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为：CGMCC No.15921。本发明的菌株WP52适生条件范围宽，易培养，对低、中、高浓度偏二甲肼均具有降解作用，效率高，成本低，可应用于偏二甲肼污染水体和土壤的生物修复，达到彻底降解偏二甲肼的目的。

技术领域

本发明涉及一株偏二甲肼降解菌株及其应用，属于微生物技术领域。

背景技术

偏二甲肼(UDMH)，分子式为C₂H₈N₂，它是一种高能燃料，广泛应用于导弹、卫星和飞船等航天器的发射中。偏二甲肼在生产、运输或储存过程中的不慎排放，以及发射过程中产生的大量废水，都会对环境造成污染。我国对偏二甲肼在环境中的允许浓度有严格限制。

环境中偏二甲肼的处理方法主要有物理、化学和生物方法。物理和化学方法存在处理不彻底、成本高或存在二次污染等问题。生物方法具有高效、低耗，绿色环保等优点，是一种应用前途广泛的处理方法。目前，国内外有关偏二甲肼生物降解方面的研究报道较少，涉及到能够降解偏二甲肼的微生物菌株则更少，且主要围绕中低浓度(≤50mg/L)偏二甲肼的生物降解。本发明将提供一种能够对低、中、高浓度偏二甲肼均有降解作用的微生物菌株WP52及其应用。

发明内容

本发明的目的在于提供一株能够降解偏二甲肼的菌株WP52及其应用。

本发明所提供的偏二甲肼降解菌株WP52，筛选方法是：采集发射场附近土样，添加到偏二甲肼浓度40-300mg/L的无机盐液体培养基中，在温度为28-37℃，转速为150-200r/min条件下培养2-7d后，用牛肉膏蛋白胨培养基、无机盐培养基和马铃薯固体培养基划线分离，在温度为28-37℃下培养2-7d。然后，将分离得到菌株在上述固体培养基上划线纯化，得到纯化菌株。同时，采用稀释涂布法，直接用土样制成悬浊液涂板，按照上述方法分离并纯化菌株。

将纯化得到菌株，分别接种于偏二甲肼为唯一氮源、浓度为50-300mg/L的无机盐液体培养基中，在温度为28-37℃，转速为150-200r/min条件下培养，定期取样，测定偏二甲肼含量，并计算降解率。选取降解率高的菌株，由此筛选得到偏二甲肼降解菌株WP52。

无机盐培养基：K₂HPO₄ 1.000-3.000g/L，KH₂PO₄ 1.000-3.000g/L，NaCl 5.000-8.000g/L，MgSO₄ 0.200-0.800g/L，CaCl₂ 0.010-0.050g/L，FeSO₄ 0.005-0.010g/L，H₃BO₃0.100-0.200mg/L，ZnSO₄ 0.100-0.200mg/L，偏二甲肼40-300mg/L，葡萄糖0.0-5.000g/L。固体培养基添加琼脂10.0-15.0g/L。

本发明所提供的菌株WP52，经过16S rDNA提取，PCR扩增，测序，序列比对，进化树构建，并结合形态特征观察，确定该菌株为Pseudomonas extremaustralis(适冷假单胞菌)，并命名为适冷假单胞菌WP52(Pseudomonas extremaustralis WP52)。该菌株已于2018年6月11日保存于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心(简称CGMCC)，保藏号为：CGMCC No.15921，保藏单位地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所。