[发明专利]水稻清蛋白的提取方法及电泳检测方法

说明书

本发明提供水稻清蛋白的提取方法及电泳检测方法。稻米经自然风干后，研磨成大米粉，向大米粉中按固液比1g：1mL加入水，搅拌至均匀，浸提1h后离心，取上清液，即为水稻清蛋白提取液。利用本发明提供的水稻清蛋白提取方法，提取的清蛋白更加充分，提高了清蛋白的提取率，且得到的电泳图谱更加清晰。本发明首次将水稻清蛋白电泳技术应用于稻米食味品质评价中，从蛋白质组分结构方面对稻米食味品质进行评价，更加科学。本发明的水稻清蛋白提取方法，适合于不同来源的水稻品种的鉴定，对指导水稻品质育种等具有重要意义。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体地说，涉及水稻清蛋白的提取方法及电泳检测方法。

背景技术

水稻品种的品质性状已成为育种工作的重要目标，早期品质选择方法的实用性与合理性是育种者关心的重要问题。水稻食味品质是水稻品质育种的终极目标，在水稻早期世代材料筛选上一直是盲区，没有较好的评价技术。蛋白质作为稻米品质的主要性状，是稻米品质改良不可忽视的重要方面。关于蛋白质与稻米品质之间的关系，国内外已有的报道主要集中在表观蛋白质含量与食味品质之间的关系变化上。通常稻米蛋白质含量越高其食味值越低，而对于蛋白质含量接近的稻米其食味值有的相差较大，需从蛋白质组分、结构方面加以阐述。

水稻蛋白质中的贮藏蛋白质是水稻的第二大营养成分，含量占5.5％-12％。稻米中的蛋白质根据其在不同溶剂中的溶解性不同可分为清蛋白、球蛋白、醇溶蛋白和谷蛋白。贮藏蛋白在稻米中分布不均，清蛋白主要分布在糊粉层和次糊粉层。研究表明，清蛋白约占水稻总贮藏蛋白的2％-5％，是与食味品质相关的蛋白。目前有关清蛋白的研究报道甚少。仅发现一篇关于清蛋白提取方法的报道(氮素对稻米蛋白质组分含量及蒸煮食味品质的影响，杨静，东北农业大学农学院，2006年)，但得到的清蛋白含量较低，提取不充分。清蛋白电泳技术，尚未见相关报道。因此，开展水稻食味品质蛋白质电泳评价技术，将该技术用于水稻早期世代材料筛选，对于缩短育种年限，加快水稻育种进程，提高水稻育种效率具有重要意义。

发明内容

本发明的目的是针对目前水稻清蛋白提取方法中存在的问题，提供一种快速且提取率高的水稻清蛋白的提取方法。

本发明的另一目的是针对目前水稻清蛋白电泳技术空白的现状，提供了一种与稻米食味品质评价显著相关的水稻清蛋白的电泳方法。

为了实现本发明目的，第一方面，本发明提供水稻清蛋白的提取方法，稻米经自然风干后，研磨成大米粉，向大米粉中按固液比1g：1mL加入水，搅拌至均匀浸提1h后离心，取上清，即为水稻清蛋白提取液。

前述的方法，浸提后优选于室温下15000r/min离心5min。

第二方面，本发明提供水稻清蛋白的电泳检测方法，将上述获得的水稻清蛋白提取液与蛋白提取液混合，静置一段时间后，离心，取上清液进行SDS-PAGE电泳检测。

其中，所述蛋白提取液为：0.125mol/L Tris-HCl pH6.8，4％SDS，20％甘油，4mol/L脲素，5％β-巯基乙醇。

前述的电泳检测方法包括以下步骤：

1)取100μL水稻清蛋白提取液于离心管内，加入100μL蛋白提取液，振荡混匀，4℃静置30min；然后10000r/min离心5min，取上清进行SDS-PAGE电泳；

2)电泳结束，取出凝胶，于三氯乙酸溶液中固定；

3)染色与脱色：将固定后的凝胶转移至考马斯亮蓝R-250溶液中，摇床染色，然后脱色。

进一步地，步骤1)进行SDS-PAGE电泳所配制的凝胶为：15％的分离胶和4％的浓缩胶；在分离胶中，电压为100V，至浓缩胶时，电压降至80V，电泳总时长2.5h。

步骤2)将凝胶于10％三氯乙酸溶液中固定2h。