[发明专利]一种植物RNA m5C甲基化修饰的系统及方法在审
| 申请号： | 201910072821.9 | 申请日： | 2019-01-25 |
| 公开（公告）号： | CN110157695A | 公开（公告）日： | 2019-08-23 |
| 发明（设计）人： | 王东;刘志红;张月婷;贺热情 | 申请（专利权）人： | 南昌大学 |
| 主分类号： | C12N9/22 | 分类号： | C12N9/22;C12N15/113;C12N15/82 |
| 代理公司： | 江苏圣典律师事务所 32237 | 代理人： | 王玉国 |
| 地址： | 330000 江西省*** | 国省代码： | 江西;36 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 甲基化修饰 种植物 高效快速 重组核酸 胞嘧啶 高效性 | ||
1.一种植物RNA m5C甲基化修饰的系统，其特征在于：包括靶向RNA的具有RNA m5C甲基化修饰功能的重组核酸酶及其靶向RNA的gRNA。
2.根据权利要求1所述的一种植物RNA m5C甲基化修饰的系统，其特征在于：所述重组核酸酶是将靶向RNA的无切割活性的核酸酶dCas13a和dPspCas13b分别与甲基转移酶结构域进行融合，形成的具有甲基转移酶活性的重组核酸酶dCas13a-RsmB、dPspCas13b-RsmB、dPspCas13b-NOP2及dPspCas13b-NSUN2。
3.一种植物RNA m5C甲基化修饰的方法，其特征在于：应用权利要求1或2所述的植物RNA m5C甲基化修饰系统，将相应功能的酶引导到相应RNA上，实现植物RNA的m5C甲基化修饰。
4.如权利要求3所述的一种植物RNA m5C甲基化修饰的方法，其特征在于：利用所述重组核酸酶在靶位点处进行胞嘧啶碱基的甲基化，最终实现植物RNA的m5C甲基化修饰。
5.如权利要求4所述的一种植物RNA m5C甲基化修饰的方法，其特征在于：所述植物RNA的m5C甲基化修饰方法包括建立RNA m5C甲基化修饰的体外表达系统；所述体外表达系统利用原核表达系统进行体外蛋白的表达，获得带His和Msb标签的dCas13a-RsmB、dPspCas13b-RsmB、dPspCas13b-NOP2及dPspCas13b-NSUN2的融合蛋白，并建立体外甲基化反应体系。
6.如权利要求4所述的一种植物RNA m5C甲基化修饰的方法，其特征在于：所述植物RNA的m5C甲基化修饰方法包括建立RNA m5C甲基化修饰的体内表达系统；所述体内表达系统分别利用AtU6启动子驱动gRNA的表达，利用35S启动子驱动dCas13a-RsmB的表达，在植物体内进行定点m5C甲基化修饰实验。
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