[发明专利]一种大肠杆菌O157:H7胶体金免疫检测试剂盒及其应用

说明书

本发明提供一种大肠杆菌O157:H7胶体金免疫检测试剂盒及其应用，涉及生物技术领域。该试剂盒包括LAMP引物组和胶体金试纸；所述LAMP引物组包括引物ZF3、ZB3、ZFIP、ZBIP、ZFLP和ZBLP，所述引物ZFLP的5'端标记有FITC，所述引物ZBLP的5'端标记DIG；所述引物ZF3、ZB3、ZFIP、ZBIP、ZFLP和ZBLP的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：6所示。本发明本发明试剂盒克服了现有检测方法耗时长、操作繁琐、准确性差的缺点，操作简单、价格低廉，可实现快速、准确地检测大肠杆菌O157:H7的胶体金免疫检测试剂盒。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及一种大肠杆菌O157:H7胶体金免疫检测试剂盒及其应用。

背景技术

大肠杆菌O157:H7是重要的食源性病原菌，能够在全世界范围内引起动物、家禽和人类爆发感染，不仅关乎食品安全，而且与医疗和公共卫生问题密切相关。

现如今，许多报道尝试研制更特异和敏感的方法检测大肠杆菌O157:H7。传统的培养鉴定技术使用选择性培养基或者显色平板检测大肠杆菌O157:H7，但是这种方法费时，费力，准确性差。

发明内容

本发明的目的在于克服现有检测方法耗时长、操作繁琐、准确性差的缺点，提供一种操作简单、价格低廉，可实现快速、准确地检测大肠杆菌O157:H7的胶体金免疫检测试剂盒。

本发明的目的采用如下技术方案实现。

一种大肠杆菌O157:H7胶体金免疫检测试剂盒，其特征在于包括LAMP引物组和胶体金试纸；所述LAMP引物组包括引物ZF3、ZB3、ZFIP、ZBIP、ZFLP和ZBLP，所述引物ZFLP的5'端标记有FITC，所述引物ZBLP的5'端标记DIG；所述引物ZF3、ZB3、ZFIP、ZBIP、ZFLP和ZBLP的核苷酸序列分别如SEQ ID NO：1～SEQ ID NO：6所示。

在本发明中，所述引物浓度均为15～25μM。

在本发明中，所述胶体金试纸包括硝酸纤维素膜和胶体金结合垫，所述胶体金结合垫包被有地高辛单克隆抗体的胶体金标记物；所述硝酸纤维素膜上设有检测线和质控线；所述检测线上包被有抗FITC抗体；所述质控线包被有葡萄球菌A蛋白。

优选的技术方案中，所述抗FITC抗体包被浓度为0.5-0.7mg/mL，所述葡萄球菌A蛋白的包被浓度为0.15-0.35mg/mL。

优选的技术方案中，所述胶体金试纸还包括吸水纸、样品层析垫和底板。

优选的技术方案中，所述底板上设有硝酸纤维素膜，在所述硝酸纤维素膜的两端分别设有吸水纸和胶体金结合垫，在胶体金结合垫上设有所述样品层析垫。

本发明还提供以非诊断为目的采用所述试剂盒检测大肠杆菌O157:H7的方法，包括如下步骤：

(1)提取大肠杆菌O157:H7的基因组DNA；

(2)将步骤1获得的基因组DNA作为LAMP反应中的模板DNA，进行LAMP扩增，获得扩增产物；

(3)将步骤(2)得到的扩增产物滴加到胶体金试纸上，观察结果；若只有质控线出现条带，则样品中无大肠杆菌O157:H7；若质控线和检测线均出现条带，则样品中含有大肠杆菌O157:H7。

优选的技术方案中，所述LAMP扩增的反应条件为55-65℃反应50-70min，然后在75-90℃反应10-20min。