[发明专利]一种基于HPLC法对κ-酪蛋白分型检测的方法

权利要求书

1.一种基于HPLC法对κ-酪蛋白分型检测的方法，其特征在于，包括如下步骤：S1、样品制备：向分装的冷冻奶样中加入等体积的工作液Ⅰ，样品融化后振荡几秒混匀得混合液，室温静置；将混合液10000r/min 4℃离心5min，除去表层乳脂，取底层溶液于新的离心管中，加入工作液Ⅱ稀释，混匀，过滤到进样瓶中待测；

S2、标准品准备：配制κ-酪蛋白标准品，浓度为10g/L；

S3、色谱检测：利用高效液相色谱对κ-酪蛋白标准品和样品进行检测，根据κ-酪蛋白标准品中AE型和B型各自的保留时间定性，峰面积定量，外标法绘制工作曲线计算AE型和B型κ-酪蛋白的含量。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述工作液Ⅰ为包含有0.1mol/L BisTris，6mol/L盐酸胍，5.37mmol/L柠檬酸钠和19.5mmol/L DTT的混合溶液；所述工作液Ⅱ为以0.1％TFA的水溶液为溶剂的4.5mol/L盐酸胍溶液。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述工作液Ⅰ为包含有0.1mol/L BisTris，6mol/L盐酸胍，5.37mmol/L柠檬酸钠和19.5mmol/L DTT的混合溶液；所述工作液Ⅱ为以0.1％TFA的水溶液为溶剂的4.5mol/L盐酸胍溶液。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S1中，所述底层溶液与工作液Ⅱ的体积比为1:3。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述高效液相色谱的色谱柱为C8 3.5μm，100×4.6I.D.。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述高效液相色谱的流动性A为0.1％TFA的水溶液，流动性B为0.1％TFA乙腈溶液。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述液相梯度洗脱程序为：0min：67％流动相A；5min，65％流动相A；6min，63％流动相A；8min，60％流动相A；12min，59％流动相A；16min，59％流动相A；20min，58.5％流动相A；23min，58％流动相A；24.1min，57.7％流动相A；26min，57.6％流动相A；30min，57.3％流动相A；32min，57％流动相A；35min，67％流动相A；45min，67％流动相A；其中，每个时间段中除流动相A外，剩余为流动相B，流动相A与流动相B之和为100％。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，在步骤S3中，所述高效液相色谱的流速为0.5mL/min，柱温为45℃，吸收波长为214nm，进样体积为10μL。