[发明专利]肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒及检测系统

权利要求书

1.一种肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，用于检测已经脱离肺癌实体瘤进入外周血中的循环肿瘤细胞，其特征在于，包括：

EGFR免疫磁球，用于捕获所述循环肿瘤细胞，其制备过程如下：

步骤一，按二甲基十八烷基环氧丙基氯化铵：胆固醇＝1:1的质量比，将二甲基十八烷基环氧丙基氯化铵和胆固醇进行混合，得到第一混合物；

步骤二，按去乙醇后的磁珠溶液：CH₂Cl₂＝1：1～1：5的体积比，将去乙醇后的磁珠溶液溶解于CH₂Cl₂，得到第一溶液；

步骤三，按所述第一溶液：所述第一混合物＝1：5～1：10的体积质量比，将所述第一溶液和所述第一混合物进行混合，得到第二溶液；

步骤四，按二油酰磷脂酰胆碱溶液：羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐溶液：所述第二溶液＝1：1：5～1：1：12的体积比，将二油酰磷脂酰胆碱溶液、羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐溶液以及所述第二溶液进行混合，得到第三溶液；

步骤五，将所述第三溶液进行室温超声后除去残留的CH₂Cl₂，得到第四溶液；

步骤六，按照EGFR抗体：所述第四溶液＝1：16～1：20的质量体积比，将EGFR抗体和所述第四溶液进行混合，得到所述EGFR免疫磁球。

2.根据权利要求1所述的肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：

其中，所述羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐溶液中的羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐的制备过程如下：

按环氧十六季铵盐：羧甲基壳聚糖＝30:1的质量比，将环氧十六季铵盐和羧甲基壳聚糖共溶于dd H₂O中，同时加入等体积的异丙醇，50℃～55℃搅拌过夜，然后用分子量为10000道尔顿的透析袋透析24h，再进行冻干，即得到所述羧甲基壳聚糖十六烷基季铵盐。

3.根据权利要求1所述的肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于，还包括：

染色剂，用于对所述EGFR免疫磁球所捕获的所述循环肿瘤细胞进行染色，包括第一染色剂、第二染色剂以及第三染色剂，

其中，所述第一染色剂为4',6-二脒基-2-苯基吲哚，

所述第二染色剂为细胞角蛋白8、18、19标记的异硫氰酸荧光素，

所述第三染色剂为白细胞共同抗原CD45标记的藻红蛋白。

4.根据权利要求1所述的肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于还包括：

用于构建高通量测序文库的接头组以及引物组，

其中，所述接头组包括第一接头和第二接头，

所述第一接头的序列为5’-gatcggaagagcacacgtctgaactccagtcactgcagtatctcgtatgccgtcttctgcttg-3’，

所述第二接头的序列为5’-aatgatacggcgaccaccgagatctacactctttccctacacgacgctcttccgatct-3’，

所述引物组包括上游引物和下游引物，

所述上游引物的序列为5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3’，

所述下游引物的序列为5’-CAAGCAGAAGACGGCATACGA-3’。

5.根据权利要求4所述的肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于：

其中，所述高通量测序文库的大小为300～450bp。

6.根据权利要求1所述的肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒，其特征在于，还包括：

RNase-Free ddH₂O以及2×Blood Direct PCR Master Mix。

7.一种肺癌循环肿瘤细胞检测系统，用于检测已经脱离肺癌实体瘤进入外周血中的循环肿瘤细胞，其特征在于，包括：

肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒以及高通量测序仪，

其中，所述肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒为权利要求1～6中任意一项所述的肺癌循环肿瘤细胞检测试剂盒。