[发明专利]一种基于DNA纳米管的电化学发光生物传感器及其制法和应用

权利要求书

1.一种基于DNA纳米管的电化学发光生物传感器在甲基化酶和黄曲霉素检测中的应用，其特征是：利用DNA纳米管放大信号技术，设计了电化学发光生物传感器，通过“on-off”检测模式，实现了对甲基化酶和黄曲霉素的灵敏分析；目标甲基化酶引发了发夹DNA的甲基化和剪切反应，将Ru(phen)₃²⁺标记的纳米管组装到电极上，实现了甲基化酶的电化学发光检测；进一步利用纳米管上的适体结合目标黄曲霉素，纳米管结构破坏释放出信号探针，对黄曲霉素进行ECL检测；

具体如下：

步骤1.DNA纳米管-Ru(phen)₃²⁺探针的制备：三种DNA单链S1,S2和S3溶于TE缓冲溶液中，从95℃到室温进行退火反应，组装DNA纳米管；取50μL纳米管溶液与100μL、2mM的Ru(phen)₃²⁺在37℃下温育7小时；

步骤2.ECL生物传感器的制备及目标检测：将金电极用α-Al₂O₃粉磨光，用纯水冲洗并用氮气吹干，在0.5M H₂SO₄溶液中，进行电化学扫描，得到完整的循环伏安峰，冲洗干净；取20μL金胶滴加在电极表面，自然晾干；将10μL、1.0μM的发夹DNA滴在电极表面室温过夜，然后用1mM MCH反应1小时；接着将不同浓度的甲基化酶、剪切酶以及DNA纳米管-Ru(phen)₃²⁺信号探针顺序滴在电极表面反应2小时；再将不同浓度的黄曲霉素滴到电极表面，37℃下反应3小时；然后用PBS溶液冲洗电极；在200mM,pH 7.4含有20mM TPA的缓冲溶液中进行ECL信号检测。