[发明专利]一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞

说明书

本发明公开了一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞，金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体包括IsdB单链抗体基因，HBD3基因，和BCE1‑IL1α复合型启动子；将细菌诱导型表达载体pIsBD转染山羊乳腺上皮细胞，获得重组细胞。本发明提供的一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞，用于抗乳腺炎。

技术领域

本发明涉及动物抗病育种技术领域，更具体的说是涉及一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞。

背景技术

乳腺炎是由病原菌引起的乳腺炎症反应，该病造成巨大经济损失，给世界奶业的发展带来了巨大的障碍。导致乳腺炎发生的病原菌可达上百种，其中金黄色葡萄球菌是一种最为重要的乳腺炎病原菌。临床上主要采用抗生素治疗乳腺炎，造成了耐药菌产生和药物残留等问题。金葡菌的多重耐药性使传统的抗生素治疗方法无法获得满意的效果，其治愈率较低。疫苗本应成为一种理想的乳腺炎防治措施，但由于细菌的基因遗传变异，而导致疫苗的保护效果不理想。人β-防御素3(humanβ-defensin 3，HBD3)具有广谱抗菌作用，对革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌都有活性，尤其对金黄色葡萄球菌具有强烈的杀伤性，并可杀灭多重耐药的金黄色葡萄球菌，病原微生物对其不易产生耐药性。但HBD3对骨架系统比较发达的哺乳动物细胞无伤害作用，安全性较高。

研究人员利用分子生物学和胚胎体外生产技术，制备了多种抗乳腺炎动物模型，结果表明，乳腺表达抗菌肽能够显著提高动物抗乳腺炎能力，该技术为防治乳腺炎提供了一条重要途径。在上述研究中，乳蛋白启动子用于驱动抗菌肽表达，在泌乳期外源抗菌肽随着乳蛋白表达而表达，从而防止病原菌感染乳腺组织。但是这种策略存在一些问题：首先，除了泌乳期之外，干奶期和转化期也是乳腺炎易感时期，而抗菌肽只在泌乳期表达，不能防止干奶期乳腺炎的发生；其次，HBD3在乳腺泌乳期持续表达，对乳品安全和乳腺生理功能可能存在不安全因素。因此，在抗乳腺炎动物进入生产应用之前，必须解决上述安全性问题。而且，研究发现防御素在体内的半衰期较短，体内注入防御素几分钟到数小时后，血液中的防御素就会被清除，在一定程度上抑制了防御素到达靶标区发挥其活性。

因此，提供一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞，用于抗乳腺炎，是本领域技术人员亟需解决的问题。

发明内容

有鉴于此，本发明提供了一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞，用于抗乳腺炎。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体，包括IsdB单链抗体基因，HBD3基因，和BCE1-IL1α复合型启动子。

进一步，一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体的构建方法，具体步骤如下：

(1)制备IsdB单克隆抗体；

(2)制备抗IsdB单链抗体-HBD3融合蛋白；

(3)优化细菌诱导型启动子，获得BCE1-IL1α复合型启动子；

(4)将IsdB-HBD3融合蛋白基因置换载体pSBD中HBD3基因，BCE1-IL1α复合型启动子置换载体pSBD中IL1α启动子，获得IsdB-HBD3细菌诱导型表达载体pIsBD。

进一步，所述金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体在抗乳腺炎中的应用。

进一步，一种含有金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体的重组细胞，将细菌诱导型表达载体pIsBD转染山羊乳腺上皮细胞，获得重组细胞。

进一步，所述含有金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体的重组细胞，在抗乳腺炎中的应用。

经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明公开提供了一种金葡菌靶向抗菌肽细菌诱导型表达载体及其重组细胞，用于抗乳腺炎。