[发明专利]信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用

说明书

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种信号调节蛋白α片段‑抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用。本发明所述融合蛋白为含有信号调节蛋白α片段和抗FcRn单链抗体的融合蛋白，所述信号调节蛋白α片段通过连接肽与所述抗FcRn单链抗体连接。本发明所述的融合蛋白很好的保留了与hFcRn结合特异性和pH依赖性，半衰期长，可以作为融合蛋白载体用于长效大分子药物开发研究，在长效多肽和蛋白药物的开发上具有广阔的应用前景和巨大的经济、社会价值，同时SIRPα‑F8与靶向肿瘤细胞的单克隆抗体联用可以治疗肿瘤。

技术领域

本发明涉及生物技术领域，特别是涉及一种信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用。

背景技术

信号调节蛋白α(SIRPα)是广泛表达在巨噬细胞和树突状细胞等髓系细胞表面的跨膜蛋白，属于免疫球蛋白超家族分子。SIRPα胞外区包含了一个IgV和两个IgC免疫球蛋白样的结构域，其中这个具有多样性的IgV样结构域可以和其配体CD47有效结合。CD47广泛表达与组织细胞中，CD47通过和巨噬细胞表面的SIRPα结合，可以产生“别吃我”信号，组织巨噬细胞的吞噬作用。现有一些抗CD47抗体或SIRP-Ig融合蛋白，蛋白结构内都含有Fc片段。该Fc片段的作用主要有两点：一是可以延长蛋白分子的半衰期；二是可以募集巨噬细胞等来吞噬高表达CD47的肿瘤细胞。由于红细胞表面有大量CD47表达，因此，以上抗体或蛋白在抗肿瘤的同时会引起溶血等副作用。因此急需一种不含Fc结构的抗CD47蛋白药物来减少溶血等毒副作用，但是仍能保持蛋白分子的较长半衰期。

FcRn是在血管内皮细胞和髓系细胞中高表达的一类Fc受体，它与维持血液中高浓度的IgG和白蛋白水平密切相关。脉管系统通过内吞作用清除血液中废物和异物的同时，也通过FcRn以pH依赖的结合方式维持IgG和白蛋白在血液中的高浓度。FcRn功能主要是介导IgG跨细胞屏障的转运和保护IgG和血清球蛋白(Serum albumin,SA)避免在胞内的降解从而延长它们在生物体内的半衰期。其跨细胞转运和对IgG及SA的保护机制主要在于FcRn与IgG抗体和SA结合的pH依赖性，即在酸性pH条件下FcRn与IgG的Fc片段和SA结合，而在生理pH的条件下，两者因结合力微弱而发生解离。这一机制在过去的数十年中被深入研究并逐渐运用到临床以延长大分子药物在体内的存留时间和跨越细胞屏障给药。如Fc融合蛋白，SA融合蛋白以及SA结合蛋白或多肽均被广泛用于多肽和蛋白药物的半衰期延长研究，有多个Fc融合蛋白和SA结合蛋白药物已被批准上市。但除了少部分治疗性抗体药物对Fc进行基因工程改造使得半衰期延长到与天然抗体相当(～21天)的时间，大部分抗体药物及其他融合蛋白药物的半衰期仍然只有几天甚至几个小时，这主要是这些药物与FcRn的亲和力比较低或者与其结合的pH依赖性较弱造成的。因此迫切需要研发一种对FcRn有高亲和力、高pH依赖性、且易于表达的融合蛋白。

发明内容

鉴于以上所述现有技术的缺点，提供一种信号调节蛋白α片段-抗FcRn单链抗体融合蛋白及其制备与应用。本发明的融合蛋白与现有的同类产品比较，对FcRn有高亲和力、高pH依赖性、且易于表达。

本发明的第一方面，提供一种融合蛋白，为含有信号调节蛋白α片段和抗FcRn单链抗体的融合蛋白，所述信号调节蛋白α片段通过连接肽与所述抗FcRn单链抗体连接。

所述融合蛋白中，所述信号调节蛋白α片段是指信号调节蛋白α的胞外IgV样结构域，氨基酸序列如SEQ ID NO：1所示。具体为：

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