[发明专利]化学发光试剂及其在免疫检测中应用

说明书

本发明公开了化学发光试剂及其在免疫检测中应用。本发明提供的化学发光试剂含有绿原酸和化学发光底物，所述化学发光底物为鲁米诺或鲁米诺可溶性盐。本发明通过标准辣根过氧化物酶催化鲁米诺和过氧化氢的化学发光分析，证明本发明的含绿原酸的化学发光试剂检测辣根过氧化物酶的灵敏度相对于含4‑碘苯酚的化学发光试剂提高100倍以上。将本发明的含绿原酸的化学发光试剂用于蛋白免疫印迹实验，能够显著提高对目标蛋白的检测灵敏度。本发明可用于蛋白免疫印迹中检测微量蛋白。

技术领域

本发明涉及生物学和免疫学中化学发光试剂及其在免疫检测中应用。

背景技术

在生物学检测技术中，免疫学检测处于十分重要的地位，利用抗体抗原反应检测相对应的抗原抗体浓度具有高特异性的特点。然而，经典的以抗体抗原直接反应为特征的沉淀法、凝集法检测抗原抗体的灵敏度低、准确性差。于是研究者们利用过氧化物酶标记第二抗体或链酶亲和素，将免疫反应中待测抗原或抗体信号转换为方便检测的酶活力。通过酶反应的放大性和良好线性大大提高了检测的灵敏度和准确度。辣根过氧化物酶是一种稳定性高、催化能力强的过氧化物酶。常用来标记第二抗体或链霉亲和素，用于将免疫反应中待测抗原或抗体信号转换为可以检测的酶活力。

辣根过氧化物酶催化的氧化还原反应可以对酶活力进行定量测定，常用的辣根过氧化物酶底物是显色底物二氨基联苯胺和四甲基联苯胺。辣根过氧化物酶催化过氧化氢氧化二氨基联苯胺生成棕色不溶产物，适合用于蛋白免疫印迹检测和免疫组织化学检测；辣根过氧化物酶催化四甲基联苯胺生成蓝色产物，在酸性条件下，变成稳定的黄色物质，可以通过吸光度准确测定产物生成量和相对应的酶活力，适合用于酶联免疫吸附检测。然而这些辣根过氧化物酶的显色底物仍然存在检测灵敏度低、定量线性范围窄等严重缺点。研究者们发现利用化学发光底物可以显著提高辣根过氧化物酶检测的灵敏度和线性范围，于是各种化学发光底物逐渐得到开发。特别是基于鲁米诺和过氧化氢的氧化还原底物，通过加入4-碘苯酚等酚类化学发光增强剂(Pure and Applied Chemistry,1987,59(5),651-654)，可以很好地通过化学发光反应检测辣根过氧化物酶的酶活力。

在蛋白免疫印迹实验中，需要检测的蛋白很多都是微量蛋白。目前市场销售的增强化学发光液的灵敏度仍然不能满足蛋白免疫印迹实验的需要。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何增强辣根过氧化物酶催化鲁米诺和过氧化氢反应过程中的化学发光强度。

为了解决上述技术问题，本发明提供了化学发光试剂。

本发明所提供的化学发光试剂为化学发光组合物，所述化学发光试剂含有绿原酸和化学发光底物，所述化学发光底物为鲁米诺或鲁米诺可溶性盐。本发明的化学发光试剂也可称为含绿原酸的化学发光试剂。

上述化学发光试剂中，所述鲁米诺可溶性盐可为鲁米诺钠盐。

上述化学发光试剂中，所述化学发光试剂可由绿原酸和所述化学发光底物组成。该化学发光试剂中，所述绿原酸和所述化学发光底物可分别单独包装，也可混合在一起。该化学发光试剂中，所述绿原酸和所述化学发光底物的配比可为0.1-20.0mmol绿原酸：2.5mmol所述化学发光底物，0.5-2.0mmol绿原酸：2.5mmol所述化学发光底物，或1.0-2.0mmol绿原酸：2.5mmol所述化学发光底物。

上述化学发光试剂中，所述化学发光试剂还可含有进行化学发光反应所需的其它物质，如三羟甲基氨基甲烷和/或盐酸和/或水等。

上述化学发光试剂中，所述化学发光试剂可由绿原酸、所述化学发光底物和下述至少一种物质组成：三羟甲基氨基甲烷、盐酸和水。