[发明专利]一种利用酶标仪准确检测植物甾醇酯含量的方法

说明书

本发明公开了一种利用酶标仪准确检测植物甾醇酯含量的方法，该方法：取待测样品，加入到乙酸乙酯中，超声波处理至完全溶解后，得到植物甾醇酯待测液；将待测液和质量浓度为0.0015～0.015％的磷硫铁显色剂混合摇匀后，室温下显色，得到显色液；取50～300μL的显色液至于酶标仪中进行检测，测得待测样品的吸光光度值；绘制标准曲线，得到待测样品中植物甾醇酯的含量。本发明方法通过采用乙酸乙酯作为植物甾醇酯的溶剂，采用质量浓度为0.0015～0.015％的磷硫铁溶液作为显色剂，与酶标仪检测进行配合，不仅实现了在微量条件下进行检测，达到通量高检测的目的，而且检测的准确度高、精密度高、检出限低、显色稳定。

技术领域

本发明涉及植物甾醇酯含量的检测技术领域，尤其涉及一种利用酶标仪准确检测植物甾醇酯含量的方法。

背景技术

植物甾醇具有降低血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的效果。由于植物甾醇的水溶性和油溶性均不理想，而酯化后能明显提高在食用油和脂肪中的溶解度，甾醇酯能够在人体内转化成甾醇和脂肪酸，植物甾烷醇酯在肠道中的水解率达到90％，所以其具有植物甾醇和脂肪酸两部分的生理功能。植物甾烷醇酯主要有β－谷甾醇酯，植物甾醇酯，菜油甾醇酯三类，目前，植物甾醇酯主要应用于涂抹食品和色拉调料中。植物甾醇酯制品已经获得FDA“一般认为安全(GRAS)”的认可，成为功能性食品的一种发展方向。

植物甾醇酯的检测在国内外的研究较少，主要集中于植物甾醇的检测。

目前，检测植物甾醇的方法有分光光度法、高效液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法以及红外光谱法等。其中，高效液相色谱法、薄层色谱法、气相色谱法及红外光谱法由于测定成本高、操作复杂，皆不适用于大批量样品的检测，而分光光度法操作简便、成本较低，分光光度法中主要有可见光比色法和酶标仪微量法。

紫外—可见光分光光度计在植物甾醇的检测中较为普遍，其样品的前处理方法主要为：以无水乙醇作为溶剂配制一定浓度的植物甾醇溶液，加入一定量的10％磷硫铁显色剂震荡摇匀，在室温中显色一定时间。利用紫外—可见光分光光度计检测植物甾醇含量。但是，该方法在检测过程中存在检测通量低，操作复杂，一般一次只能检测三个左右的样品，对于大批量的样品操作时间长、清洗不方便、显色稳定性差，以及检测的样品量大等问题。

针对以上不足，采用多功能酶标仪代替紫外—可见光分光光度计，能高效、准确、快速检测植物甾醇酯含量，更省时省力。然而，对于植物甾醇酯的检测而言，常规紫外—可见光分光光度计检测植物甾醇时所采用的样品前处理方法，并不适用于植物甾醇酯在多功能酶标仪上的检测。

因此，有必要探究一种适合于植物甾醇酯在多功能酶标仪上进行检测的方法，从而同时实现高通量检测和精准检测的目的。

发明内容

本发明提供了一种利用酶标仪准确检测植物甾醇酯含量的方法，该方法不仅可以在微量条件下进行含量检测，达到高通量检测的目的，而且还具有检测准确度高、精密度高、检出限低、显色稳定等特点，尤为适合植物甾醇酯的检测。

具体技术方案如下：

一种利用酶标仪准确检测植物甾醇酯含量的方法，包括以下步骤：

(1)取含植物甾醇酯的待测样品，加入到溶剂乙酸乙酯中，超声波处理至植物甾醇酯完全溶解后，得到植物甾醇酯待测液；

(2)将植物甾醇酯待测液和质量浓度为0.0015～0.015％的磷硫铁显色剂混合摇匀后，室温下显色，得到显色液；

(3)取50～300μL的显色液至于酶标仪中进行检测，测得待测样品的吸光光度值；

(4)取植物甾醇酯标准样品，根据步骤(1)～(3)，得到不同浓度标准样品的吸光光度值，绘制标准曲线后，得到吸光光度值与植物甾醇酯含量的线性回归方程；