[发明专利]一种产5α-雄烷二酮的基因工程菌及其应用

权利要求书

1.一株产5α-AD的基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌是以主产AD的分枝杆菌为宿主细胞，异源表达5α-还原酶基因所得；

所述5α-还原酶基因的核苷酸序列如序列表SEQ ID NO.2所示；

所述分枝杆菌为新金分枝杆菌MNR M3△ksdD。

2.权利要求1所述一株产5α-AD的基因工程菌的构建方法，其特征在于，步骤如下：

（1）将所述5α-还原酶基因和表达质粒pMV261通过酶切，连接，构建pMV261-5α重组质粒；

（2）将所述重组质粒pMV261-5α导入至所述新金分枝杆菌MNR M3△ksdD感受态细胞中，构建的基因工程菌MNR M3△ksdD/261-5α。

3.权利要求1所述一株产5α-AD的基因工程菌用于发酵制备5α-AD的用途。

4.如权利要求3所述用途，其特征在于：所述基因工程菌发酵制备5α-AD具体如下：

将所述产5α-AD的基因工程菌经种子培养后，按5-10%的接种量接种至发酵培养基中，28-32℃，130-200r/min，pH6.5-7.8条件下，发酵4-8d；

所述发酵培养基组成如下：K₂HPO₄ 0.5 g/L，MgSO₄·7H₂O 0.5 g/L，柠檬酸铁铵 0.05g/L，柠檬酸 2 g/L，磷酸氢二铵 3.5 g/L，葡萄糖10 g/L，植物甾醇1-30 g/L，余量为水，pH6.5-7.8。