[发明专利]一种检测Y染色体拷贝数变异的方法和试剂盒

说明书

本发明涉及遗传病基因检测领域，具体涉及一种检测Y染色体拷贝数变异的方法和试剂盒。该方法具体包括：获取样本，并从所述样本中提取基因组DNA；将所述基因组DNA中Y染色体特异性基因和任意一条常染色体的内参基因进行定量实时扩增；获取并比较扩增过程相同循环下的所述特异性基因和内参基因荧光增加值，与预设的标准品荧光值进行对比，获得Y染色体拷贝数。本发明采用的荧光PCR法相对定量通常采用比较Ct法，本发明结合荧光比值算法和标准品设置，无需靶基因和内参基因扩增效率相等，且检测更加准确、灵敏，能够快速准确的获得Y染色体上拷贝数，确定Y染色体拷贝数的变异情况。

技术领域

本发明涉及遗传病基因检测领域，具体涉及一种检测Y染色体拷贝数变异的方法和试剂盒。

背景技术

拷贝数变异(copy number variation,CNV)是指与参考序列相比，发生在基因组上的长度大于1kb的DNA片段由于重复、缺失等原因造成的微结构变异，是人类疾病的重要致病因素之一。

目前对CNV进行检测的方法很多，包括基于芯片的比较基因组杂交(array-basedcomparative genomic hybridization，aCGH)、单核苷酸多态性-微阵列(SNP-array)、基于二代测序的CNV分析、多重连接探针扩增技术(multiplex ligation-dependent probeamplification,MLPA)等。这些技术检测位点多、准确性高、部分方法检测分辨率达到1bp。

但是上述测试方法的检测周期长，检测成本高，无法满足现有技术对拷贝数变异检测的需求。

发明内容

针对现有技术中存在不足，本发明所提供的技术方案是：

一种检测Y染色体拷贝数的方法包括以下步骤：

获取样本，并从所述样本中提取基因组DNA；

将所述基因组DNA中Y染色体特异性基因SRY和任意一条常染色体的内参基因进行定量实时扩增；

获取并比较扩增过程相同循环下的所述特异性基因SRY和内参基因荧光增加值，与预设的标准品荧光值进行对比，获得Y染色体拷贝数。

一种检测Y染色体拷贝数变异的试剂盒，具体包括：引物对Ⅰ、引物对Ⅱ、探针Ⅰ、探针Ⅱ、TaqDNA聚合酶、PCR缓冲液、dNTPs、ROX荧光PCR参比染料和基因组DNA。

有益效果：

本发明通过将Y染色体上的特异性基因和任意一条常染色体进行定量实时扩增，获得两种基因的荧光增加值，通过将两者该荧光增加值的比值与标准品进行对比获得Y染色体拷贝数变异情况。本发明无需靶基因和内参基因扩增效率一致，实验流程简单，检验结果更接近真实值。特别的，本发明设置标准品，使得拷贝数定量更加准确可靠。

还公开了一种检测Y染色体拷贝数变异的试剂盒，利用本发明提供的方法和试剂盒，能够快速准确的获得Y染色体上拷贝数，确定Y染色体拷贝数的变异情况。

附图说明

附图1为不同比例标准品的荧光比值柱状图；

附图2为18例正常男性和4例超雄症患者的拷贝数检测荧光比值柱状图；

附图3为样本A2拷贝数检测Rsry/rabif比值柱状图。

具体实施方式

为了更加清楚阐述本发明的技术内容，在此结合具体实施例予以详细说明，显然，所列举的实施例只是本技术方案的优选实施方案，本领域的技术人员可以根据所公开的技术内容显而易见地得出的其他技术方案仍属于本发明的保护范围。

名词解释：