[发明专利]一种ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒

权利要求书

1.一种ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，包括包被有抗H-FABP单克隆抗体的酶标板、HRP标记的检测用抗H-FABP多克隆抗体、标准品、标准品稀释液、样本稀释液、浓缩洗涤液、显色液A、显色液B、终止液、检测抗体稀释液。

2.如权利要求1所述的ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述包被有抗H-FABP单克隆抗体的酶标板的制备方法，包括以下步骤：

1)将包被抗H-FABP单克隆抗体溶于包被缓冲液中至包被抗体浓度为2ug/mL，得到混合液；

2)将步骤1)获得的混合液加入微孔板的孔中，每孔0.1mL，加盖板膜，2-8℃放置18-24小时；用0.5％Tween20-PBS洗涤5次；再向每孔中加入封闭液，每孔0.12mL，在2-8℃放置18-24小时；用0.5％Tween20-PBS洗涤5次；置25-35℃干燥间内，湿度40％，干燥时间20-24小时，铝箔袋封装板子，2～8℃保存，得到酶标板。

3.如权利要求2所述的ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述包被缓冲液的组成：无水碳酸钠1.59g；NaHCO₃ 2.98g；苋菜红0.01g；纯化水定容至1000mL；

所述封闭液的配方：Na₂HPO₄·12H₂O 5.20g；NaH₂PO₄·2H₂O 0.87g；蔗糖20.00g；干酪素10.00g；BSA 10.00g；纯化水定容至1000mL。

4.如权利要求1所述的ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述HRP标记的检测用抗H-FABP多克隆抗体的制备方法，包括以下步骤：

(1)抗H-FABP多克隆抗体在0.01M pH9.0-9.5的碳酸盐缓冲溶液中透析，终浓度为5mg/mL；

(2)取10mg HRP溶解于2mL H2O，终浓度为5mg/mL，获得HRP溶液；

(3)向步骤(2)获得的HRP溶液中加入0.4mL浓度为37.5mg/mL的NaIO4溶液，室温避光搅拌氧化20min；

(4)氧化后的酶液在1mM pH4.4的醋酸盐缓冲液4℃透析过夜，透析截留分子量12000-14000，换液3次；

(5)取出透析袋中溶液，加入0.2M Na2CO3缓冲溶液，调至pH为9.0-9.5，并迅速与步骤(1)获得的pH9.0的抗体1:1混合，室温避光轻微搅拌2h；

(6)加入新配的6mg/mL NaBH4溶液100ul，混匀，4℃反应还原2h；

(7)还原后的反应体系，于0.15M pH7.4PBS中4℃透析过夜，换液3次；

(8)加入BSA使终浓度为2-3mg/mL，混匀，10000rpm×3min，收集上清，分装冻存，获得HRP标记的检测用抗H-FABP多克隆抗体。

5.如权利要求1所述的ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述标准品为H-FABP抗原，购自芬兰HyTest公司；

所述标准品稀释液的组成：溶剂是20mM、pH7.4的PBS缓冲液，溶质及其在所述标准品稀释液中的浓度如下：质量百分含量1％酪蛋白，质量百分含量8％海藻糖，质量百分含量3％甘露醇，1mM EDTA，质量百分含量0.5％甘氨酸，150mMNaCl，质量百分含量0.1％防腐剂Proclin-300。

6.如权利要求1所述的ELISA法定量检测心型脂肪酸结合蛋白的检测试剂盒，其特征在于，所述样本稀释液的组成：溶剂是20mM pH6.0的PBS缓冲液，溶质及其在所述样本稀释液中的质量浓度如下：0.2％明胶，0.2％酪蛋白，150mMNaCl，0.01％Tween-20，5％蔗糖，0.5/万溴钾酚紫，0.1％防腐剂Proclin-300。