[发明专利]同时测定牛奶中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类抗生素残留量的方法

说明书

本发明公开了一种QuEChERS‑超高效液相色谱‑串联质谱联用，同时测定牛奶中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类5类38种抗生素残留量的分析方法。本发明优化了提取溶剂、净化条件及色谱、质谱条件、可实现对多种抗生素的快速、高效及灵敏的检测，可保障我国食品和环境安全。

技术领域

本发明属于分析技术领域，具体涉及一种同时测定牛奶中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类5类38种抗生素残留量的方法。

背景技术

抗生素主要用于预防和治疗细菌性感染类疾病，以提高生产质量和效率，常作为兽药和饲料添加剂应用于畜禽养殖业中。在奶牛养殖中，抗生素主要用于治疗乳牛乳腺炎、腹泻等疾病。而泌乳期乳牛过量使用抗生素或休药期不足，可能导致牛奶中抗生素残留，并通过食物链对人类身体健康造成不良影响，如引起胃肠不适、产生过敏反应、导致肝功能损害等。此外，滥用抗生素或长期摄入含抗生素食品可能会产生细菌耐药性，对人类健康危害更加严重，同时，抗生素残留对环境也产生越来越大的影响。为了保障食品安全，我国农业部第235号公告规定了动物源性食品中抗生素最大残留限量（MRL），许多国家及组织也制定了抗生素最大残留限量，其限量标准也越来越严格。因此，建立一种快速、简便、灵敏的多种抗生素检测方法十分必要。

目前，抗生素的检测方法主要有微生物和生物分析方法、酶联免疫法、液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等。但微生物和生物分析方法、酶联免疫法特异性不高，灵敏度较差，液相色谱法存在检测抗生素种类受限制、检出限高等缺点。超高效液相色谱-串联质谱法成为抗生素残留检测分析的一个重要趋势。由于不同种类抗生素物理性质的差异，以及提取和净化过程的特异性，基质复杂性，以往的研究报道多数是关于单一类别抗生素或少数几个抗生素的检测方法，不能适用于样品快速筛查分析，有一定的局限性。

发明内容

为解决现有牛奶中抗生素多残留检测的难题，本发明提供了一种同时测定牛奶中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类抗生素残留的方法。

为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种同时测定牛奶中磺胺类、喹诺酮类、四环素类、氯霉素类、大环内酯类抗生素残留量的方法，其包括如下步骤：

一、标准溶液的配制

1）准确称取14种磺胺类标准品（磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺噻唑、磺胺甲基嘧啶、磺胺异恶唑、苯酰磺胺、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺氯哒嗪、磺胺喹恶啉、磺胺地索辛），15种喹诺酮类标准品（丹诺沙星、氧氟沙星、依诺沙星、诺氟沙星、环丙沙星、培氟沙星、洛美沙星、恩诺沙星、氟罗沙星、沙拉沙星、司帕沙星、奥比沙星、双氟沙星、恶喹酸、氟甲喹），4种四环素类标准品（强力霉素、四环素、土霉素、金霉素），3种氯霉素类标准品（氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考），2种大环内酯类标准品（红霉素、罗红霉素），分别用甲醇溶解并定容至10mL，得到浓度为1 mg/mL的不同标准品储备液；

2）准确量取不同标准品储备液各0.1 mL，置于同一10 mL容量瓶中，加甲醇混匀并定容，配成浓度为10 µg/mL的混合标准品溶液，于-20 ℃密闭下保存；

3）准确移取一定量的混合标准品溶液，配成系列标准品溶液；

二、样品溶液的制备

1）准确称取1.00 g待测牛奶样品至15 mL聚丙烯离心管中，加入5 mL 0.5%（v/v）甲酸乙腈溶液，漩涡震荡后超声10 min，再以5000 r/min离心5 min，取上清液；