[发明专利]一种苦皮藤酰基转移酶18466及其基因序列

说明书

本发明公开了一种苦皮藤酰基转移酶18466及其基因序列，该基因全长1383bp，编码461个氨基酸，酶蛋白分子量大小为54KDa，以pET28a大肠杆菌蛋白表达质粒为载体，以大肠杆菌BL21为宿主，实现了苦皮藤酰基转移酶18466的异源表达，以香叶醇为底物酰基化生成单萜酯化合物。因此研究酰基转移酶的功能及其序列特征对萜类化合物的酯化物具有重要意义。

技术领域

本发明属于酶基因工程及酶工程领域，具体涉及一种来源于苦皮藤(Celastrμsangμlatμs)的酰基转移酶18466以及基因序列C-18466。

背景技术

萜类化合物是化学结构和构象最为复杂的天然产物，目前发现的萜类化合物有80000种左右，占据天然产物的三分之一，广泛分布于植物和微生物中。萜类化合物的生物合成需要的最基本的结构单元是二甲基烯丙基焦磷酸Dimethylallyl diphosphate，DMAPP和异戊烯基焦磷酸Isopentenyl diphosphate，IPP来自于甲羟戊酸途径和脱氧木酮糖磷酸酯途径。不同数量的DMAPP和IPP首尾聚合再经过特殊的萜合酶的催化形成单萜(C₁₀)倍半萜(C₁₅)和二萜(C₂₀)等天然产物。单萜类化合物是萜类化合物中结构和种类最丰富的一种，已经被广泛应用于生物制药、天然绿色农药杀虫和杀菌剂、燃料替代品和食品级香料和调味剂等行业开发使用。香叶醇是一个非环单萜醇类化合物，它是玫瑰油、马丁香油和香茅油等香精油的主要成分之一。香叶醇及其酯广泛用作日用香精和食用香精，是玫瑰系香精的主剂，用于配制日用产品和食品。

在植物生长发育过程中存在着各种次生代谢产物的修饰过程，如氧化还原、糖基化、甲基化、羟基化和酰基化反应过程。其中酰基化是修饰植物次生代谢产物的一个至关重要的过程，能改变次级代谢物的挥发性、极性、化学稳定性和生物活性。该过程需要酰基转移的催化。酰基转移酶是一类具有多功能的蛋白质大家族，不同的酰基转移酶对生物体的遗传、基因的表达、物质代谢和信号传导等过程起重要的作用。因此研究酰基转移酶的功能及其序列特征对萜类化合物的酯化物具有重要意义。

发明内容

本发明的目的在于弥补现有技术的不足，提供一种苦皮藤酰基转移酶18466及其基因序列，还提供了包含本发明基因的质粒及包含该表达质粒的宿主细胞，并利用宿主细胞(重组菌)诱导表达该苦皮藤酰基转移酶18466，以香叶醇为底物酰基化生成单萜酯化合物。

本发明的技术方案是：

一种苦皮藤酰基转移酶，记为18466，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

编码上述苦皮藤酰基转移酶18466的基因，记为C-18466，其核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

一种重组质粒，记为pET28a-His6-18466，含有编码苦皮藤酰基转移酶18466的基因，诱导型启动子T7，6个组氨酸筛选标签。

一种重组菌，记为BL21/pET28a-His6-18466，含有上述重组质粒。

本发明的有益效果是：本发明一种苦皮藤酰基转移酶18466及其基因序列，该基因全长1383bp，编码461个氨基酸，酶蛋白分子量大小为54KDa，以pET28a大肠杆菌蛋白表达质粒为载体，以大肠杆菌BL21为宿主，实现了苦皮藤酰基转移酶18466的异源表达，以香叶醇为底物体外酰基化生成乙酸香叶酯和苯甲酸香叶酯，对单萜酯的生产及运用具有重要意义，同时该基因的获得对植物萜类酰基化修饰机制和生物胁迫机理研究奠定基础。

附图说明

图1为BL21/pET28a-His6-18466重组大肠菌株验证DNA琼脂糖凝胶图谱(目的条带大小为1383bp)；

M：标准DNA分子尺；泳道1为C-18466基因DNA样品；