[发明专利]褐鲳鲉抗菌肽moronecidin及其应用

说明书

本发明公开了褐鲳鲉(Sebastiscus marmoratus)抗菌肽moronecidin(sm‑Mor)及其应用。本发明从褐鲳鲉肝脏转录组文库中获得了褐鲳鲉抗菌肽sm‑Mor编码基因，采用固相化学合成方法获得纯度达95％以上的sm‑Mor蛋白，该蛋白对多种病原微生物具有较强的抗菌活性，尤其对谷氨酸棒杆菌、施氏假单胞菌及新型隐球菌具有较强的抑杀活性。sm‑Mor来源于鱼类，既可作为水产养殖饲料添加剂应用，也可进一步研制为抗菌剂等，具有广泛的应用前景。

技术领域

本发明涉及海洋分子生物学技术领域，具体涉及褐鲳鲉抗菌肽moronecidin及其应用。

背景技术

近半个世纪以来，世界人口爆发性增长使人类社会对食品的需求大幅增长，以此为契机而飞速发展的畜牧和水产养殖业不可避免地面临各种病原微生物引起的病害所导致的减产。抗生素的应用在一定程度上提高了畜牧和水产养殖业的经济效益及饲料的利用率，然而其滥用也给人类社会带来了严重的威胁。我国每年生产抗生素原料约21万吨，其中9.7万吨应用于畜牧和水产养殖业，占年总产量的46.1％。畜牧和水产养殖业中抗生素的使用不仅能够直接导致病原菌产生耐药性，甚至对养殖相关的水体、土壤产生二次污染；不仅如此，残留在畜禽、水产品中的抗生素还可通过食物链进入人体内，严重威胁人类健康。因此，寻求高效、绿色的抗生素替代品成为近年来的研究热点。

自然界中，抗菌肽(antimicrobial peptide，AMP)广泛存在于生物体内，是生物体先天性免疫系统的重要组成部分，一般具有较为广谱的抗菌活性。天然抗菌肽通常由12～100个氨基酸组成，具有较好的热稳定性和水溶性，对细菌、真菌等具有较强的抑杀活性。抗菌肽研究始于1972年，瑞典科学家Boman等在果蝇中发现抗菌肽及其免疫功能，随之1981年成功分离得到天蚕素A和B。迄今为止，约有2800种抗菌肽被成功分离和研究。随着研究技术的发展，越来越多的抗菌肽被分离鉴定出来，研究者们亦对其作用机制进行了深入的探索。大量研究表明，抗菌肽能够通过多种不同作用机制发挥其活性功能，如破坏细胞质膜结构、攻击微生物线粒体、抑制细菌蛋白质合成及细胞壁形成及与微生物染色质结合发挥其杀菌功能等。近年来，研究者们发现一些抗菌肽甚至具有抑杀病毒、寄生虫、抑制癌细胞生长等能力，且对高等动物的正常体细胞无明显细胞毒性，且不易使受试菌产生耐药性。在越来越多耐药性微生物被发现的今天，抗菌肽因其物理吸附、破坏微生物膜的作用机理不易使细菌产生耐药性的特征，在临床医药等领域具有良好的应用前景。抗菌肽因其具有在体内可降解、安全高效、不易产生耐药性等特点，被认为是抗生素的理想替代品之一。因此，有必要对未知抗菌肽进行深入研究、对已知抗菌肽进行进一步改造，使得更多新型、高效、有针对性的低毒抗菌肽及其制品在畜禽和水产养殖领域广泛应用。

发明内容

本发明的目的在于克服现有技术的不足之处，提供了褐鲳鲉抗菌肽moronecidin及其应用。本发明于褐鲳鲉肝脏转录组文库中首次获得抗菌肽sm-Mor基因序列，进一步利用PCR方法对其核苷酸序列进行了验证，采用固相化学合成方法获得了sm-Mor多肽，实验发现其具有广谱抗细菌、真菌活性，有作为水产养殖饲料添加剂、抗菌剂应用的前景。本发明为来源于褐鲳鲉肝脏表达的抗菌肽sm-Mor的首次报道。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案之一是：

一种抗菌肽，为褐鲳鲉(Sebastiscus marmoratus)抗菌肽moronecidin(sm-Mor)，其氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，为：

MRFITLFLVLSMVVLMAEPGEAFFRHIVGAISRIFGQKQRDMADQQELDQRAFDRERAFA

所述褐鲳鲉抗菌肽sm-Mor的开放阅读框序列如SEQ ID No.2所示，为：