[发明专利]采用柱前衍生HPLC-MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法

说明书

本发明公开了一种采用柱前衍生HPLC‑MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法，该方法是以淀粉类糖浆专属性成分麦芽寡糖（DP6‑8）为指标，采用柱前衍生高效液相色谱蒸发光检测法检查启脾丸是否存在掺假蜂蜜的现象。采用本发明的方法可以避免启脾丸中白术成分所含的寡糖对检测结果的干扰，阴性对照样品无干扰，灵敏度高、检测效果好，为启脾丸辅料蜂蜜的投料监管提供了技术支撑。

技术领域

本发明涉及中医药检测技术领域，具体是一种采用柱前衍生HPLC-MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法。

背景技术

寡糖又称低聚糖，由2～10个相同或不同的单糖单位通过糖苷键连接起来而形成的直链或含分支链的糖类化合物。寡糖和单糖的物理及化学性质很相像，它们都溶于水，很多低聚糖具有甜味，可被费林溶液氧化，所不同的是寡糖在水解后产生十个以下的单糖分子。根据单糖单位的数目，分为双糖、三糖、四糖和五糖等，组成寡糖的单糖可相同也可不同，与一般糖苷不同之处在于它们的配基也是糖；如蔗糖为双糖，棉子糖为三糖，水苏糖为四糖，毛蕊花糖为五糖。寡糖易溶于水或其他极性溶剂，有还原性和非还原性之分。寡糖是一种新型功能性糖源，广泛应用于食品、保健品、饮料、医药、饲料添加剂等领域，它是替代蔗糖的新型功能性糖源，是面向二十一世纪“未来型”新一代功效食品。

药蜜丸系指饮片细粉以炼蜜为黏合剂制成的丸剂。启脾丸（大蜜丸）由人参、麸炒白术、茯苓、甘草、陈皮、山药、莲子（炒）、炒山楂、六神曲（炒）、炒麦芽、泽泻等十一味药材细粉加炼蜜混合制得而成。启脾丸具健脾和胃之功效；临床用于脾胃虚弱，消化不良，腹胀便溏。启脾丸中炼蜜所占比例较大，约为55%。天然蜂蜜中掺入淀粉类糖浆（大米糖浆、果葡糖浆等）是蜂蜜掺假中普遍存在的一种现象。而天然蜂蜜中几乎不含5糖（DP5）以上的寡糖，而各种淀粉糖浆中均含5糖（DP5）以上的寡糖，为了保证启脾丸的质量，需要对启脾丸中寡糖的种类和用量进行监控。

发明内容

本发明的目的是提供一种采用柱前衍生HPLC-MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法，该方法以淀粉类糖浆专属性成分麦芽寡糖（DP6-8）为指标，采用高效液相色谱蒸发光检测法判断启脾丸是否存在掺假蜂蜜的现象。采用该方法可以避免启脾丸中白术成分所含的寡糖对检测结果的干扰，阴性对照样品无干扰，检测效果好。

一种采用柱前衍生HPLC-MS法检查启脾丸中寡糖掺伪的方法，具体内容如下：

（1）色谱条件：色谱柱Waters CORTECS (150 mm×4.6 mm，2.7 μm)，以乙腈为流动相A，水（含0.1%甲酸）为流动相B，按表1的规定进行梯度洗脱；流速为0.5 mL/min；柱温35℃。

（2）质谱条件：采用电喷雾正离子模式（ESI⁺），多反应离子监测（MRM）；干燥气温度：300℃ ；雾化器压力：40Psi；干燥气流速：5 L/min；鞘流气温度：300℃ ；鞘流气流速：10L/min；毛细管电压：4000 v；喷嘴电压：500 V；选择m/z 1483.7→511.3（麦芽七糖）和m/z1321.5→511.3（麦芽六糖）作为检测离子。质谱参数见表2。

（3）对照品溶液的制备：取麦芽六糖和麦芽七糖适量，精密称定，加水制成每1 mL含麦芽六糖0.9μg、麦芽七糖2.8μg的混合溶液，摇匀，即得。

（4）供试品溶液的制备：取样品适量，剪碎，取1 g，精密称定，置15 mL离心管中，精密加水10mL，涡旋至全部溶散，离心（12000 r/min）10分钟，精密吸取上清液1mL，缓缓加至活性炭固相萃取柱中，用7%乙醇25 mL洗脱，弃去洗脱液，再用50%乙醇10 mL洗脱，收集洗脱液，置10 mL量瓶中，加50%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得。