[发明专利]一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法

权利要求书

1.一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法，其特征在于，该方法包括下列步骤：

(a)将Matrigel冻融使之成为液态；制备冰球或干冰球，并将该冰球或干冰球加入所述液态的Matrigel中搅拌混合，以此获得固液混合物；

(b)将步骤(a)获得的所述固液混合物升温，使得其中的Matrigel成胶，该过程中，所述固液混合物中的冰球或干冰球融化，并在成胶后的Matrigel中留下孔隙，使得获得的所述Matrigel基质胶具有多孔结构；

(c)在步骤(b)中获得的具有多孔结构的所述Matrigel基质胶中种植角膜缘干细胞及角膜缘微环境细胞，使其在所述多孔结构中形成三维立体结构，以此获得所需的组织工程角膜缘。

2.如权利要求1所述的一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述冻融的温度优选为不超过4℃，冻融时间优选为2h～12h。

3.如权利要求1或2所述的一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述将步骤(a)获得的所述固液混合物中的Matrigel成胶，优选在温水浴中将所述Matrigel成胶，其中，所述温水浴的温度优选为22℃～37℃。

4.如权利要求1或2所述的一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法，其特征在于，在步骤(b)中，所述将步骤(a)获得的所述固液混合物中的Matrigel成胶，优选按照下列步骤进行：

(b1)将步骤(a)获得的所述固液混合物快速冷冻获得固态冷冻物；

(b2)将所述固态冷冻物中的冰球或干冰球升华，以此在所述固态冷冻物中形成孔隙，获得多孔结构的冷冻物；

(b3)将所述多孔结构的冷冻物升温成胶，以此获得Matrigel基质胶。

5.如权利要求1-4任一项所述的一种基于Matrigel制备组织工程角膜缘的方法，其特征在于，在步骤(a)中，所述制备冰球优选采用在液氮中用去离子水制备，其中，冰球的直径大小根据实际需求进行选取，干冰球优选采用干冰打粉机将干冰制成不同粒径的干冰球粉末。