[发明专利]血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用

权利要求书

1.一种血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用，所述circ-TTC17分子标志物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。

2.如权利要求1所述的血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用，其特征在于：用于诊断食管鳞癌分期中的试剂为实时定量PCR试剂盒。

3.如权利要求1或2所述的一种血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用，其特征在于：根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1的circ-TTC17分子标志物设计了2对引物用于检测该序列，引物核苷酸序列为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ IDNO.5。

4.如权利要求1所述的一种血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用，其特征在于：circ-TTC17分子标志物的检测方法，包括样品总RNA提取、RNA反转录、实时定量PCR扩增。

5.如权利要求4所述的一种血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用，其特征在于：样品总RNA提取、RNA反转录、实时定量PCR扩增的具体步骤包括，血浆总RNA提取使用mir Vana PARIS Kit试剂盒，第二步，使用Prime-Script将RNA逆转录成cDNA TM一步法RT-PCR试剂盒，甘油醛3-磷酸脱氢酶用作内部对照，使用ABI7500系统和SYBR GreenPCR Master Mix进行所有qRT-PCR反应。

6.如权利要求5所述的一种血液中circ-TTC17分子标志物在食管鳞癌诊断试剂的应用，其特征在于：样品总RNA提取、RNA反转录、实时定量PCR扩增的具体步骤包括，第一步，血浆总RNA提取，血浆、血清总RNA提取使用mir Vana PARIS Kit试剂盒，具体步骤如下：

所有试剂均需恢复到室温下使用，取出血浆/血清样本冰面上融化备用，洗脱液 95℃预热备用;

400μl血浆/血清样本加入已经添加等体积的2X Denaturing Solution的EP管中，充分震荡混匀；

加入等体积的Acid-Phenol:Chloroform，震荡混匀1min，随后室温下10000g离心5min；

转移上层水相至新的EP管，并记录转移水相体积，随后添加1.25倍体积100%乙醇至EP管中，充分混匀后转移裂解液/乙醇混合物通过滤器，10000g离心30s；

加700μl mi RNA Wash Solution 1清洗滤器1次，10000g离心15s，随后加入500μlWash Solution 2/3清洗滤器2次，10000g离心15s；

50μl 95℃预热的无核糖核酸酶水洗脱滤器上的RNA，10000g离心30s，-80℃长期保存；

紫外分光光度计测定样本浓度和纯度；

第二步，RNA反转录和实时定量PCR，使用Prime-Script将RNA逆转录成cDNA TM一步法RT-PCR试剂盒，甘油醛3-磷酸脱氢酶用作内部对照，使用ABI7500系统和SYBR Green PCRMaster Mix进行所有qRT-PCR反应。

7.一种用于诊断食管鳞癌分期中的实时定量PCR检测试剂盒，其特征在于：包括根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1的circ-TTC17分子标志物设计并合成出特异性用于实时定量 PCR的检测引物。

8.如权利要求7所述的实时定量PCR检测试剂盒，其特征在于：特异性引物如序列表中SEQ ID NO.4、SEQ ID NO.5。

9.一种核苷酸序列为SEQ ID NO.1的circ-TTC17分子标志物。