[发明专利]一种罗汉果葫芦二烯醇合酶突变体及其构建方法和应用

权利要求书

1.一种罗汉果葫芦二烯醇合酶突变体，其特征在于，其氨基酸序列如SEQ ID NO.1所示。

2.编码权利要求1所述的罗汉果葫芦二烯醇合酶突变体的基因，核苷酸序列如SEQ IDNO.2所示。

3.一种包含如权利要求2所述的基因的重组载体。

4.携带权利要求2所述基因或权利要求3所述重组载体的重组表达菌株。

5.一种制备权利要求4所述重组表达菌株的方法，其特征在于，是在如SEQ ID NO.3所示的野生型罗汉果葫芦二烯醇合酶基因序列的基础上，将其编码的第50位精氨酸突变成赖氨酸，得到突变基因，将含有突变基因的重组质粒转化到宿主菌中即得到重组菌株。

6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述方法具体是:

（1）以含有SEQ ID NO.3所示核酸序列的质粒为模板，将能表达出第50位赖氨酸的基因序列记为50K，以序列ATTGTTGCAAGTTCATAAAGCTAAAAAAGCTTTTCATGATGATAGA为所述50K基因的正向引物50K-F，以序列TCTATCATCATGAAAAGCTTTTTTAGCTTTATGAACTTGCAACAAT为所述50K基因的反向引物50K-R，进行PCR扩增，获得重组质粒；

（2）将上一步得到的重组质粒，转化到E.coli DH5α感受态细胞中；

（3）提取E.coli DH5α感受态细胞中的重组质粒，转入到表达菌株，获得重组表达菌株。

7.根据权利要求6所述的构建方法，其特征在于，步骤（1）所述质粒为pCEV-G4-Km质粒。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，步骤（3）所述重组表达菌株为重组酵母菌株BY4742-SgCS-50K。

9.权利要求1所述的罗汉果葫芦二烯醇合酶突变体在提高葫芦二烯醇的产量上的应用。