[发明专利]一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法

权利要求书

1.一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，利用分子克隆技术，获得异源表达UDP-糖基转移酶和蔗糖合成酶的基因工程菌，经自诱导发酵产酶后以细胞粗提液直接进行催化反应，利用粗提液中本身含有的微量UDP及额外添加的蔗糖，建立双酶循环反应体系，有效催化甜菊甙生产莱鲍迪苷E；其中，所述UDP-糖基转移酶为番茄来源糖基转移酶UGTSL2的突变体N358F；所述突变体N358F的氨基酸序列如SEQ.No.5所示；所述蔗糖合成酶为马铃薯来源蔗糖合成酶StSUS1，基因序列如SEQ.No.2所示，氨基酸序列如SEQ.No.4所示。

2.根据权利要求1所述的一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，所述基因工程菌为含有UDP-糖基转移酶和蔗糖合成酶的共表达的载体的重组大肠杆菌；所述自诱导发酵过程中诱导剂在发酵培养液中浓度为0.01~0.5%。

3.根据权利要求1所述的一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，所述细胞粗提液为发酵得到的菌体经超声或低温高压破碎所获得的含有UDP-糖基转移酶和蔗糖合成酶的粗酶液。

4.根据权利要求1所述的一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，所述双酶循环反应体系为：蔗糖经蔗糖合成酶分解，与细胞粗提液中的UDP反应生成果糖和UDP-葡萄糖，UDP-葡萄糖再与甜菊甙经UDP-糖基转移酶催化生成莱鲍迪苷E。

5.根据权利要求1所述的一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，所述底物甜菊甙的起始反应浓度为2~60 g/L，蔗糖与甜菊甙的质量比为1~10，粗酶液在反应体系中的总蛋白浓度为1~25 mg/mL。

6.根据权利要求1所述的一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，所述催化反应采用水相反应体系，水溶液pH值为6~8。

7.根据权利要求1所述的一种酶法制备莱鲍迪苷E的方法，其特征在于，所述催化反应的反应温度为20~50℃，反应时间为1~48 h。