[发明专利]血液中circ_SLC7A5分子标志物在诊断食管鳞癌及预后中的应用

说明书

本发明公开了一种血液中circ_SLC7A5分子标志物在诊断食管鳞癌及预后中的应用，涉及circ_SLC7A5分子标志物的发现、检测、应用，设计并合成出特异性用于实时定量PCR的检测引物。血液中的circ_SLC7A5可作为ESCC患者的血浆标志物，针对目标人群对食管癌内镜筛查依从性差，以及临床上确诊的食管鳞癌患者绝大多数都是中晚期的现状，在食管鳞状细胞癌变进程中找到理想的分子预警信号，有针对性的进行内镜检查，病理确诊，以减轻病人痛苦，避免过度医疗，节省医疗资源。

技术领域

本发明涉及肿瘤分子生物学领域，具体为一种血液中circ_SLC7A5分子标志物在诊断食管鳞癌及预后中的应用。

背景技术

食管癌是严重威胁人类健康的最常见恶性肿瘤之一，主要有两种病理分型：鳞癌和腺癌。90％的食管癌是鳞状细胞癌，其分布具有明显的地域差异。我国ESCC发病率占全世界70％以上，预后较差，5年总体生存率只有15％-25％。2016年临床医师癌症杂志报道，食管癌已经成为中国发病率最高的五种肿瘤之一，其发病率在男性中排第三位，女性中排第五位。

环状RNA(circRNAs)是一种新的内源性非编码RNA，在20世纪90年代早期被确定为乱序外显子的转录本，其结构、功能和机制被相继报道，成为后来20年的研究热点。不同于以5'端和3'端为末端的传统线性RNA，circRNAs是缺少5'端帽和3'端poly(A)尾的特殊闭环结构[7]，且与哺乳动物细胞中微小RNA(miRNAs)和长链非编码RNA(lncRNAs)相比，具有更高的稳定性和序列保守性，是因为它们具有核酸酶抗性。近期大量研究报道，在不同物种中circRNAs均有表达。基于生物信息学分析和高通量测序技术的迅速发展，研究人员发现了数以万计的circRNAs，发现它们参与血管病变、神经系统疾病、肿瘤等疾病发生发展。CircRNAs芯片分析技术已应用于许多肿瘤，包括消化系统肿瘤，神经系统肿瘤，泌尿系统肿瘤，头颈部肿瘤等，如下咽鳞状细胞癌、喉鳞状细胞癌、基底细胞癌、胰腺导管腺癌、胃癌、肝细胞癌、甲状腺乳头状癌等。然而，在食管鳞癌中，circRNAs鲜有报道。

目前ESCC尚没有血浆肿瘤标志物来评估病情，内镜是金标准，但是创伤大，患者不易接受。

发明内容

为解决上述问题，本发明公开了一种血液中circ_SLC7A5分子标志物在诊断食管鳞癌及预后中的应用，针对目标人群对食管癌内镜筛查依从性差，以及临床上确诊的食管鳞癌患者绝大多数都是中晚期的现状提出，在食管鳞状细胞癌变进程中找到理想的分子预警信号，有针对性的进行内镜检查，病理确诊，以减轻病人痛苦，避免过度医疗，节省医疗资源。血浆中的circ_SLC7A5可作为ESCC患者的血浆标志物，这一检查方法容易被受检者接受，更可成为ESCC患者的早诊、病情进展的判断以及预后评估的有效手段。

为了达到以上目的，本发明供如下技术方案：

一种血液中circ_SLC7A5分子标志物在诊断食管鳞癌及预后中的应用，所述circ_SLC7A5分子标志物的核苷酸序列为SEQ ID NO.1。circ_SLC7A5的ID号为circ_0040796。

在本发明中，用于食管鳞癌诊断或者预后的试剂为实时定量PCR试剂盒。

本发明的根据核苷酸序列为SEQ ID NO.1的circ_SLC7A5分子标志物设计了2对引物用于检测该序列，引物核苷酸序列为SEQ ID NO.2、SEQ ID NO.3、SEQ ID NO.4、SEQ IDNO.5。

特异性引物分别如下：

本发明还公开了一种circ_SLC7A5分子标志物的检测方法，包括样品总RNA提取、RNA反转录、实时定量PCR扩增。

具体方法如下：第一步，总RNA提取

a.血浆总RNA提取