[发明专利]一种在冷藏温度-5℃至0℃下保存运输胚胎的方法

说明书

本发明公开了一种在冷藏温度‑5℃至0℃下保存运输胚胎的方法。它包括S1、将保存液封装于低温冷冻管中，按配置100ml的保存液计，保存液以磷酸盐缓冲液为基础液由0.8mol/kg蔗糖和3mg/ml牛血清白蛋白混合而成；S2、将含有2细胞期胚胎的输卵管从动物体内摘出后，对输卵管的两端进行热封处理；S3、首先将经热封处理的输卵管快速置于低温冷冻管中的保存液内，随后在将低温冷冻管作端口封闭处理后快速浸入于内部温度为‑5℃至0℃的真空保温容器中；S4、在48h内将真空容器运至目的地。本发明通过对保存液的成分及其配比、冷藏温度以及系列处理步骤的掌控，可以简单快捷且经济适用的在‑5℃至0℃状态下运输新鲜的胚胎，并保持胚胎具有足够高的成活率以及胚胎移植后的活产率。

技术领域

本发明涉及生物工程技术领域，尤其是一种在冷藏温度-5℃至0℃下保存运输胚胎的方法。

背景技术

动物胚胎的获取工作通常是在实验室内进行的，而胚胎移植过程则通常是在养殖场内(或其他专用实验室内)进行的；因此，在胚胎生产后到移植前的这段周期内，则会存在一个对胚胎进行临时保存和运输的过程，而此过程往往会对胚胎在受体动物体内的发育以及妊娠率起到至关重要的影响。

自1949年Polge等人发现在精液冷冻稀释液中加入保护剂——甘油可以起到降低低温冷冻过程对精子的损害的特殊保护作用开始，直到1972年Mazur等人建立了低温保存的理论体系，并且利用低温保存技术在世界上第一次成功地保存了小鼠的胚胎，低温保存技术才得以被推广应用。而低温保存技术在胚胎冷冻过程中的应用主要是将生物胚胎置于液氮温度(-196摄氏度)内进行长时间存储，其不但可以避免原微生物感染的问题，而且结合胚胎移植技术可以使胚胎的运输相较于生物活体运输更容易，从而也为保存运输重要遗传资源动物胚胎提供了全面的保障。

然而，针对胚胎的低温保存技术目前大多只能依靠液氮的低温来实现，为了运输冷冻的胚胎，只能通过含有液氮的运输罐进行运输。液氮运输罐本身价格昂贵，而且运输过程胚胎必须依靠液氮来维持低温状态，在胚胎运输到目的地后还需要返还空置的液氮运输罐，不但操作极为繁琐，而且运输及保存的费用极为高昂；显然，这对于研究单位或生产单位转移重要的遗传资源来讲是无奈之举。

发明内容

针对上述现有技术存在的不足，本发明的目的在于提供一种在冷藏温度-5℃至0℃下保存运输胚胎的方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

一种在冷藏温度-5℃至0℃下保存运输胚胎的方法，它包括以下步骤：

S1、保存液入管：首先，将保存液封装于低温冷冻管中，然后再将低温冷冻管置于-5℃至0℃的环境中作平衡冷冻保存；其中，按配置100ml的保存液计，保存液以磷酸盐缓冲液为基础液由0.8mol/kg蔗糖和3mg/ml牛血清白蛋白混合而成，保存液的用量与低温冷冻管的容积之间的比值为1:1.8；

S2、获取胚胎：将含有2细胞期胚胎的输卵管从动物体内摘出后，对输卵管的两端进行热封处理；

S3、胚胎入管：首先将经热封处理的输卵管快速置于低温冷冻管中的保存液内，随后在将低温冷冻管作端口封闭处理后快速浸入于内部温度为-5℃至0℃的真空保温容器中；

S4、胚胎运输：在48h内将真空容器运至目的地，然后回收胚胎作后续保存或利用。

优选地，在步骤S1中，将低温冷冻管置于0℃的冰水中进行至少10min的平衡保存处理。

优选地，在步骤S3中，首先将经热封处理的输卵管快速置于低温冷冻管中的保存液内，然后对低温冷冻管作端口封闭处理后将低温冷冻管封装于塑料薄膜袋中，最后将塑料薄膜袋快速浸入含有0℃冰水的真空保温容器中。

优选地，在步骤S2中，利用经酒精加热的镊子对输卵管的两端作热封处理。