[发明专利]一种软枣猕猴桃幼苗性别早期鉴定分子标记及其应用

权利要求书

1.一种软枣猕猴桃幼苗性别早期鉴定分子标记，其特征在于，所述分子标记的正向引物序列为：5′–TCTTCCTCTTGGTGCCCG–3′，反向引物序列为：5′–TCAAAGAACCGCTAATCCCAT–3′，利用所述正向引物和反向引物对软枣猕猴桃基因组DNA进行扩增，其扩增产物长度为609bp，序列如下：

TCTTCCTCTTGGTGCCCGGTGTTTCCCCATGGGGTATATGAATTTCCACTTGAAGATCCGGAACTCTGACGCTTTGAATTTTGTCCTCTACTTGGACTCCCTCCAGATCGCTTCTTATTGCTCTCCCGATATTGGGACATCTCATCTAATGCTCTCTCAAAAATTATTGCTCATTGAAGGACCTCTTGATGGTTTGGCAATCGTAATATGTCTACTTTGTTGTGGATGTTTCACTACAACCCTACTTCAAACTTTCTCACCTTGCGAGATTTTGTCAAAATAATATGCGGGGCATAACAAGATAATTCTATGAACTTGGCATTGTACTCTACTACAGTCGTATTTCCTTGCACCAAATTAATAAATTCTACAATTTACTGATCCCTGACAGTTTCGAGAAAATACTCTTTGTTGAACACTTCTAAAACCCTAGGCCACAACCATAACGGCTCCAGTAGCTTTTTCAACTACCACCAAACTAGTGCGGCTTCCTCAAAAGTAAAGGTGGCAAGCGTCCCTTTCTGGTCATCAGTGCAAGGTAGGACTTCGAACACTCTCTCAAATCCCAAGAGCCAAGATTCCGCGGTCATGGGATTAGCGGTTCTTTGA。

2.如权利要求1所述的分子标记在软枣猕猴桃性别辅助选育中的应用。

3.一种软枣猕猴桃性别辅助选育试剂盒，其特征在于，所述试剂盒中含有如权利要求1中所述的引物对。

4.一种软枣猕猴桃性别早期鉴定方法，包括以下步骤：

（1）软枣猕猴桃基因组DNA的提取：

摘取软枣猕猴桃幼嫩叶片，置于液氮中冷冻之后，保存于-80℃冰箱中；取冷冻叶片组织100~200mg，装入放有1粒钢珠的2ml EP管中，再次于液氮中冷冻，用磨样机研磨至细粉状，利用植物基因组DNA提取试剂盒提取样品基因组DNA，将模板DNA浓度稀释至20ng/μL，保存于-20℃冰箱中备用；

（2）标记引物序列：

正向引物序列：5′–TCTTCCTCTTGGTGCCCG–3′，

反向引物序列：5′–TCAAAGAACCGCTAATCCCAT–3′；

（3）PCR反应体系：

浓度为400nmol • L^-1的正向引物 —— 1 μl，

浓度为400nmol • L^-1的反向引物 —— 1 μl，

ddH₂O —— 6μl，

PCR mix —— 10μl，

浓度为20ng/μl 的DNA模板 —— 2μl；

（4）PCR扩增程序：

（5）结果判定：

出现特异性条带的为雄性样品，无条带出现的为雌性样品。

5.如权利要求4所述的软枣猕猴桃性别早期鉴定方法，其PCR反应体系中所述PCR mix为含染料的2×Taq PCR MasterMix。