[发明专利]一种琼胶酶及其制备方法

权利要求书

1.一种琼胶酶，其特征在于：所述琼胶酶的氨基酸序列如SEQ NO.1所示。

2.一种琼胶酶基因，其特征在于：编码权利要求1所述的琼胶酶；其核苷酸序列如 SEQNO.2所示。

3.包含如权利要求2所述的琼胶酶基因的重组载体。

4.根据权利要求3所述的重组载体，其特征在于：所述重组载体是大肠杆菌质粒pET28a(+)-Agarase-MS或酵母质粒pPIC9k-Agarase-MS。

5.一种细胞，其特征在于：所述细胞含有权利要求2所述的琼胶酶基因的核苷酸序列，或所述细胞由包含权利要求2所述的琼胶酶基因的重组载体经转化宿主细胞而得；所述宿主细胞为大肠杆菌细胞或毕赤酵母细胞。

6.一种如权利要求2所述的琼胶酶基因的克隆方法，其特征在于：所述克隆方法包括以下步骤：Agarase-MS基因的获得：利用琼胶酶氨基酸保守片段设计简并引物，通过PCR技术获得微泡菌（Microbulbifer sp.）一段琼胶酶的编码基因；再通过genome walking获得其全长，并在NCBI数据库中进行比对分析，得到琼胶酶基因Agarase-MS。

7.一种如权利要求4所述的琼胶酶的核苷酸分子的重组载体的制备方法，其特征在于：所述Agarase-MS基因的重组载体的制备方法为：采用权利要求2所述琼胶酶基因编码核苷酸序列经EcoRI和NotI双酶切后与EcoRI和NotI双酶切的pET28a(+)载体连接，得到大肠重组表达载pET28a(+)-Agarase-MS或采用权利要求2所述琼胶酶基因编码核苷酸序列经EcoRI和 Not I双酶切后与EcoRI和NotI双酶切的pPIC9k载体连接，得到酵母重组表达载体pPIC9k- Agarase-MS。

8.一种如权利要求1所述的琼胶酶的制备方法，其特征在于：培养包含所述琼胶酶编码序列的细胞，诱导其表达，收获表达产物；通过包含琼胶酶编码序列的酵母发酵来生产琼胶酶，并通过硫酸铵沉降和离子交换色谱纯化得到了纯酶形式的目的蛋白。

9.一种如权利要求1所述的琼胶酶的应用，其特征在于：利用所述琼胶酶降解富含琼胶的底物。