[发明专利]一种三维微载体细胞吸附培养的方法有效
申请号: | 201910098003.6 | 申请日: | 2019-01-31 |
公开(公告)号: | CN109593704B | 公开(公告)日: | 2022-02-11 |
发明(设计)人: | 鄢晓君;刘伟 | 申请(专利权)人: | 北京华龛生物科技有限公司 |
主分类号: | C12N5/00 | 分类号: | C12N5/00 |
代理公司: | 北京纪凯知识产权代理有限公司 11245 | 代理人: | 关畅 |
地址: | 100195 北京市海淀区杏*** | 国省代码: | 北京;11 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 一种 三维 载体 细胞 吸附 培养 方法 | ||
1.一种三维微载体细胞吸附培养的方法,包括如下步骤:1)接种细胞:将细胞悬液与干燥的三维微载体混合,得到混合细胞悬液的微载体;
所述三维微载体为3D FloTrix微载体;
2)细胞吸附:将步骤1)中得到的所述混合细胞悬液的微载体孵育,使细胞粘附于所述三维微载体上;
3)细胞培养:步骤2)中待所述细胞粘附后,加入完全培养基,培养。
2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于:所述细胞悬液的密度为1×104~1×10 8个细胞/mL;所述细胞悬液为细胞重悬于培养基或者液态生物基质材料中得到;
所述细胞悬液的体积与所述三维微载体的质量比为1~1000μL:1mg。
3.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤1)中,所述细胞悬液与所述三维微载体采用小体积高密度溶胀吸附法混合,步骤如下:将所述细胞悬液滴加于所述三维微载体上,所述细胞悬液体积与所述三维微载体的质量比为1~10 μL:1mg或10~15 μL:1mg。
4.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述孵育条件如下:温度为35~40℃,时间为0.5~24小时;二氧化碳体积百分浓度为5~30%;
所述吸附方法包括重力吸附法、搅拌器旋转吸附法、表面声波法或磁力吸附法。
5.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:所述培养的条件如下:温度为35~40℃,二氧化碳体积百分浓度为5~30%。
6.根据权利要求1或2所述的方法,其特征在于:步骤1)之前还包括将所述三维微载体气体灭菌或射线灭菌的步骤。
7.根据权利要求6所述的方法,其特征在于:所述射线灭菌为紫外灭菌。
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