[发明专利]用于鉴定小麦春化基因VRN-D4的试剂盒及其专用成套引物对

权利要求书

1.用于鉴定VRN-D4基因的成套引物对，所述成套引物对由引物对甲和引物对乙组成；

所述引物对甲由VRND4-in1F和VRND4-in1R组成；

所述引物对乙由dA367C-F和dA367C-R组成；

所述VRND4-in1F为序列表中序列1所示的单链DNA分子；

所述VRND4-in1R为序列表中序列2所示的单链DNA分子；

所述dA367C-F为序列表中序列3所示的单链DNA分子；

所述dA367C-R为序列表中序列4所示的单链DNA分子。

2.权利要求1所述的成套引物对在如下c1）-c4）中任一种中的应用：

c1）制备鉴定或辅助鉴定VRN-D4基因的产品；

c2）鉴定或辅助鉴定VRN-D4基因；

c3）制备鉴定或辅助鉴定待测小麦是否携带VRN-D4基因的产品；

c4）鉴定或辅助鉴定待测小麦是否携带VRN-D4基因。

3.含有权利要求1所述的成套引物对的试剂盒；

所述试剂盒的功能为如下d1）-d2）中任一种：

d1）鉴定或辅助鉴定VRN-D4基因；

d2）鉴定或辅助鉴定待测小麦是否携带VRN-D4基因。

4.一种鉴定或辅助鉴定待测小麦是否携带VRN-D4基因的方法，包括如下步骤：

e1）以待测小麦的基因组DNA为模板，分别采用权利要求1中所述的引物对甲和引物对乙进行PCR扩增，得到PCR产物甲和PCR产物乙；

e2）用BstNI限制性内切酶酶切所述PCR产物乙，得到酶切产物；

电泳检测所述PCR产物甲和所述酶切产物判定待测小麦是否携带VRN-D4基因：

若引物对甲PCR扩增得到大小为210 bp的目标条带，且所述PCR产物乙可以被BstNI限制性内切酶酶切产生大小为271 bp和50 bp的两个片段，则所述待测小麦携带或候选携带VRN-D4基因；否则不携带或候选不携带VRN-D4基因。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述大小为210 bp的目标条带的核苷酸序列如序列5所示。

6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于：所述大小为271 bp的片段的核苷酸序列如序列6第1-271位所示；所述大小为50 bp的片段的核苷酸序列如序列6第272-321位所示。