[发明专利]一种以蔬菜废弃物为原料制备Bt液体发酵培养基的方法

说明书

本发明涉及一种以蔬菜废弃物为原料制备Bt液体发酵培养基的方法，制备方法包括选择蔬菜废弃物、灭菌、配制发酵培养基、优化发酵条件。本发明以四季豆汁液和白菜汁液的重量比为2∶1混合后，作为苏云金芽胞杆菌发酵培养基的原料，通过添加氮源和碳源、单因素试验筛选合适的碳源、氮源添加物和最佳的金属离子，并且利用正交试验确定添加物的最佳浓度组合，确定可溶性淀粉（6 g/L）、黄豆饼粉（6 g/L）、Al³⁺（0.4 g/L）、Fe²⁺（0.4 g/L）作为最适外源添加物。优化发酵条件为：pH（7.0）、温度（35℃）、通气量（80 mL/250 mL装量），同时，生物活性测定结果表明其制备的Bt菌株的杀虫效果良好。

技术领域

本发明涉及一种制备Bt液体发酵培养基的方法，具体涉及一种以蔬菜废弃物为原料制备Bt液体发酵培养基的方法，属于生物农药技术领域。

背景技术

苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis, Bt）作为现今高效、用量大、安全的生物杀虫剂，由于生产成本较为昂贵，造成了其价格较高。通过选择低成本的发酵原料，并通过生物统计学的方法对其培养基进行优化，提高发酵能力达到或者接近原昂贵培养基的效果。

由于Bt培养基对菌株毒力有明显的影响，因而对于Bt发酵培养基的研究一直在进行，同时Bt菌株的广泛使用及推广受到成本的限制，对基于保证菌株正常生长且具备较好杀虫效果的低成本培养基的研究也受到重视。

杨建州利用味精废水生产Bt生物农药的研究中用预处理后味精废水的上清液配制培养基，添加玉米淀粉3%，蛋白胨1%，豆粕3%，灭菌前初始p H为8.0，在温度30℃、200rpm摇床培养。吴丽云利用啤酒废弃物为原料进行Bt液态发酵的研究以1/2 啤酒原废水+1/2酸化废水为溶液,添加葡萄糖0.2%、(NH₄)₂SO₄ 0.1%、ZnSO₄ 0.05%、吐温-80 0.15%、NaCl0.6%、N物质0.4%、酵母液30% (V/V)、KH₂PO₄ 0.12%。唐凌云利用毛发水解液、沼液、城市污泥等分别合成多种培养基生产的苏云金杆菌也显著降低了工业原料成本并保证了其杀虫效果。王程辉利用酒糟废液培养Bt，周学永、郭爱莲等利用工业废水生产Bt，兰钊等通过玉米发酵酒精培养Bt。这些研究充分说明了通过废物利用制备Bt培养基的可行性，同时可以充分降低工业生产Bt生物农药的成本，大大提高了Bt杀虫剂的普遍性，同时也间接处理了自然环境、生活和工业生产作业中产生的废弃物，有效降低了对环境的污染。但是，在维持Bt原有生物活性的同时进一步降低Bt生物农药的生产成本仍然是市场经济追求的目标。

发明内容

本发明的目的在于提供一种以蔬菜废弃物为原料制备Bt液体发酵培养基的方法，能够将Bt发酵过程中的生产成本降低，所采用的生产原料为农贸市场的蔬菜废弃物。

为实现本发明的目的，采用如下技术方案。

本发明的一种以蔬菜废弃物为原料制备Bt液体发酵培养基的方法，其特征在于制备步骤如下：

（1）选择蔬菜废弃物：收集农贸市场的蔬菜废弃物进行分类分拣，选择蔬菜废弃物白菜和四季豆，分别洗净后通过榨汁机压榨和过滤取得粘稠汁液，离心，取上清液，得四季豆汁液和白菜汁液；

（2）灭菌：将步骤（1）的四季豆汁液和白菜汁液，121℃灭菌；

（3）配制发酵培养基：取步骤（2）灭菌后的四季豆汁液和白菜汁液，按质量比为2∶1混合后，添加可溶性淀粉6 g/L、黄豆饼粉6 g/L、Al³⁺ 0.4 g/L、Fe²⁺ 0.4 g/L;

（4）优化发酵条件：pH 7.0、温度 35℃、通气量 80 mL/250 mL装量。