[发明专利]一种用于细胞体外培养的细胞冻存培养基及其应用

说明书

本发明公开了一种用于细胞体外培养的细胞冻存培养基及其应用。该细胞冻存培养基由胎牛血清、二甲基亚砜和纤维蛋白原组成。本发明通过实验证明将纤维蛋白原添加到现有的细胞冻存液中，能够显著降低细胞冻存损伤，显著提高冻存细胞存活率，如显著提高淋巴细胞的冻存存活率。本发明可用于哺乳动物细胞如哺乳动物淋巴细胞的体外培养中，可用于药物先导化合物筛选、药效评价和重组蛋白类药物的生产中。

技术领域

本发明涉及生物医药领域中一种用于细胞体外培养的细胞冻存培养基及其应用。

背景技术

在药品研发和生产中，体外细胞培养是进行药物先导化合物筛选、药效评价和生产重组蛋白类药物所必需的技术。在细胞体外培养技术体系中，细胞冻存是长期保存细胞必不可少的方法。

目前细胞冻存常用的细胞冻存液是含5％-15％甘油或二甲基亚砜的牛血清，甘油和二甲基亚砜作为保护剂可以降低细胞冻存液的凝固点，同时通过慢冻快融的冻存复苏操作，可以减少细胞内冰晶形成和细胞的损伤，达到较好的细胞冻存效果(American Journalof Physiology,1984,247,C125-C142)。一般经过冻存的细胞，细胞存活率可以达到70-80％以上。但是对于离体培养存活困难的免疫细胞，尤其是淋巴细胞，对于细胞冻存中的损伤更为敏感，细胞经过冻存后存活率往往只能达到50％。在肿瘤免疫治疗中，经过遗传学改造的淋巴细胞极为珍贵，为了进一步提高冻存淋巴细胞的存活率，有必要进一步改进细胞冻存，特别是细胞冻存液配方。

纤维蛋白原是人体和动物血浆中的重要成份，在血液凝固过程中，发挥血小板之间的连接作用，并且在凝血酶的作用下，变成纤维蛋白加固血栓的形成，促进止血或病理性血栓形成。在血液凝固后的血清中，一般没有纤维蛋白原存在。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是如何提高冻存细胞(如淋巴细胞)的存活率。

为了解决上述技术问题，本发明提供了细胞冻存培养基。

本发明所提供的细胞冻存培养基，由胎牛血清、二甲基亚砜和纤维蛋白原组成。

上述细胞冻存培养基中，所述纤维蛋白原在所述细胞冻存培养基中的含量可为0.5-10.0mg/ml。

上述细胞冻存培养基中，所述纤维蛋白原在所述细胞冻存培养基中的含量可为1.0-5.0mg/ml。

上述细胞冻存培养基中，所述胎牛血清和所述二甲基亚砜的体积比可为9:1。

上述细胞冻存培养基中的胎牛血清、二甲基亚砜和纤维蛋白原可分别独立包装，也可混合在一起。

上述细胞冻存培养基中，所述细胞冻存培养基可为细胞冻存液或用于细胞冻存的组合物。

上述细胞冻存培养基中，所述细胞可为哺乳动物细胞、哺乳动物免疫细胞或哺乳动物淋巴细胞。

纤维蛋白原在制备细胞冻存培养基中的应用也属于本发明的保护范围。

上述应用中，所述细胞冻存培养基含有纤维蛋白原。

上述应用中，所述细胞冻存培养基可为上述细胞冻存培养基。

纤维蛋白原或上述细胞冻存培养基在提高冻存细胞存活率中的应用也属于本发明的保护范围。

上述应用中，所述细胞可为哺乳动物细胞、哺乳动物免疫细胞或哺乳动物淋巴细胞。

上文中，所述纤维蛋白原可为哺乳动物来源的纤维蛋白原，如来自人血浆的纤维蛋白原。