[发明专利]假链状双歧杆菌及牛奶中抗生素残留的检测方法及应用

说明书

本发明公开了一种假链状双歧杆菌DSQL‑1，于2016年2月18日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏编号为CGMCCNo.12067。并公开了其在筛检牛奶中残留四环素、青霉素和红霉素中的应用，并公开了具体的检测方法。本发明方法的筛检方法操作简单，可直接通过观察指示剂颜色变色判读结果，不需特殊精密仪器，判断方法简便、准确，灵敏度和精确度高，适合食品质量安全检查，实用性强。

技术领域

本发明属于于生命科学和食品安全领域，更具体的涉及一种假链状双歧杆菌DSQL-1及利用该菌株快速检测牛奶中残留抗生素的方法。

背景技术

牛奶中抗生素残留是牛奶安全的一个重要问题。牛奶中抗生素残留不仅会对人体产生各种不利影响，如导致人体产生耐药性,并出现肠道菌群失调、过敏反应、致畸、致突变等诸多反应。另外，还可抑制乳酸菌生长,导致发酵失败，给企业带来经济损失，以及影响牛奶及相关产品的出口和贸易。

抗生素被广泛应用于治疗和预防奶牛疾病，不可避免造成牛奶中抗生素残留。此外，在应用抗生素治疗奶牛疾病在取得效果的同时，不规范使用抗生素，如加大使用剂量、延长治疗期，甚至给泌乳期奶牛长期应用抗生素预防疾病的行为，甚至不法生产者在生鲜牛奶中加入抗生素防腐等，使得牛奶中抗生素残留超标。

抗生素残留检测是牛奶食品安全控制和管理的重要措施。目前我国食品卫生标准(GB/T 4789.27-2008)中规定的利用微生物学方法筛检牛奶中抗生素残留的检测方法有TTC法和嗜热脂肪杆菌芽孢抑制法。其中TTC法设备简单、费用低，适合大样本的筛选和基层实验室操作而被广泛使用，该法主要检测β内酰胺类的青霉素G，以及链霉素、庆大霉素和卡那霉素。另外，国标法的检测原理和结果判断根据嗜热链球菌的生长是否被残留抗生素抑制而得，由于加入样品后在37℃培养2小时，此条件下大部分环境中的细菌(如大肠埃希菌、表皮葡萄球菌等触酶阳性的细菌)均可快速生长并引起TTC的颜色发生改变，操作过程中如出现污染则会导致出现假阴性结果。

此外，目前我国采用的国标方法不包括对四环素、红霉素、万古霉素等的检测。四环素类抗生素可以预防和治疗传染病、提高饲料效率、加快动物的生长速度，在畜牧业中得到广泛应用。在奶牛的饲养过程中，四环素常用作饲料添加剂及防治奶牛的乳腺炎，从而导致牛奶中可能有四环素残留。红霉素属于大环内酯类抗生素，也被广泛用于畜、禽、水产养殖中，食品安全领域主要采用仪器法来分析动物源性食品中红霉素的残留量。

对牛奶中抗生素残留进行检测是公共卫生和食品安全管理的重要方法。面对牛奶产量的大量增加(2017年中国牛奶产量位居世界第三，35.7billion kilograms)，人民生活水平的提高和对牛奶及相关产品消费量的增加，以及牛奶场管理及牛奶相关产业的需求，建立一种简单、快速、有效检测牛奶中多种常用抗生素残留的方法具有重要意义。牛奶中最主要的抗生素风险是由乳房内治疗和常规治疗导致的，曾经最常用的β-内酰胺类抗生素目前仍在广泛使用，但随着耐药菌株的增加等原因，在乳腺炎治疗使用“非β-内酰胺类”药物的比例越来越高，这意味着非β-内酰胺类抗生素残留的风险也随着增高，因此，仅仅检测β-内酰胺类的策略非常危险，如常用的四环素类药物等将无法检测出正确结果。

微生物抑制法具有操作简便，仪器设备和人员要求不高，样品前处理简单，结果易于观察和判读，检测时间短等特点，一直被用于大批量样品的筛查。本发明主要利用四环素类、大环内酯类、β-内酰胺类等常用抗生素敏感的厌氧型益生菌菌株，建立一种基于微生物抑制法的可快速筛检和定量检测牛奶中四环素、红霉素和青霉素等抗生素的的检测方法。

发明内容

1、发明目的。

本发明筛选出一株对四环素、红霉素、青霉素等抗生素敏感的假链状双歧杆菌菌株，并由此建立一种简单、快速、灵敏的以该菌株为工作菌株进行牛奶中抗生素残留检测的筛选和定量检测方法。

2、本发明所采用的技术方案。