[发明专利]膀胱癌多靶标检测试剂盒

说明书

本发明提供了膀胱癌多靶标检测试剂盒，具体地本发明应用甲基化特异性PCR方法检测疑似膀胱癌患者尿沉渣细胞中不同基因位点甲基化情况，使血尿且有临床怀疑有膀胱癌者的检出率超过70％，而特异性达到95％以上，同时，荧光定量PCR方法的检出结果判断更加的客观，也因此更加准确，为临床医生带来了更多便捷和确定性。

技术领域

本发明涉及体外诊断试剂技术领域，具体涉及一种膀胱癌多靶标检测试剂盒。

背景技术

膀胱癌(bladder cancer，BC)是泌尿系统最常见的恶性肿瘤，占泌尿系肿瘤的首位，其发病率和复发率有逐年增加的趋势。据统计，我国每年约有145,000例患者死于膀胱肿瘤。膀胱癌多发于五十岁以上，男性发病率为女性的3～4倍。在来源于上皮组织的膀胱癌中，约90％为移行上皮癌；非上皮性膀胱肿瘤较少见，主要包括未分化癌、鳞状细胞癌、腺癌，根据细胞的分化程度可将其分为3级。浅表性膀胱癌早期诊断通常有较好的预后，然而，膀胱癌的复发率为60％～70％，居所有实体瘤的首位，其中11％的复发患者会发展为浸润性膀胱癌，患者术后通常需每年进行3～4次膀胱镜检查。

目前手术治疗、放疗和化疗的疗效并不令人满意，5年存活率在40％-60％。预后差和易复发是膀胱癌的重要特点，有效的治疗很大程度上依赖于膀胱癌的早期诊断与早期治疗。然而，膀胱癌发病隐匿，大部分患者都是因为肉眼或镜下血尿才会到医院就诊，而此时已是癌症晚期。所以寻找特异的膀胱癌早期诊断方法具有重要的临床价值。早期发现膀胱癌可以增加手术保留膀胱的机会并提高患者总体生存率，因此，如何早期发现膀胱肿瘤以及术后如何早期检测到膀胱肿瘤的复发具有非常重要的临床意义。

传统的膀胱癌检查包括肿瘤标志物检测、尿液细胞学检测、FISH检测和膀胱镜检查。在临床上被应用的膀胱癌肿瘤标记物蛋白包括NMP22(Nuclear Matrix ProteinNumber 22)和BTA(bladder tumor antigen)，但这两个标记物都存在敏感性和特异性不高的情况(NMP22敏感性40％，特异性99％；BTA敏感性66％，特异性65％)。而且，这两个标志物的检测样本都是血液，需要抽血检查。荧光原位杂交(FISH)采用荧光标记的核酸探针检测3、7、17、9p21号染色体上的着丝点，以确定染色体有无与膀胱癌相关的非整倍体。FISH检测同样不能令人满意(敏感性72％，特异性83％)。膀胱镜检查属于有创检查，费用高且会给患者带来一定的痛苦，而且其结果还会受操作者主观性影响。细胞学活检则存在灵敏度低的缺陷(38％左右)。因此无创、高敏感性、高特异性的检测方法的开发是未来膀胱癌检测和监控亟需解决的问题。

发明内容

本发明的目的在于提供一种膀胱癌多靶标检测试剂盒。

在本发明的第一方面，提供了一种检测膀胱癌的引物对组，所述引物对组包括第一引物对集，所述第一引物对集包括选自以下引物对一至引物对三中的一种或多种引物对：

引物对一：

1F：SEQ ID NO.:1；1R：SEQ ID NO.:2

引物对二：

2F：SEQ ID NO.:5；2R：SEQ ID NO.:6

引物对三：

3F：SEQ ID NO.:9；3R：SEQ ID NO.:10。

在另一优选例中，所述引物对组还包括第二引物对集，所述第二引物对集包括选自以下引物对四至引物对六中的一种或多种引物对：

引物对四：

4F：SEQ ID NO.:3；4R：SEQ ID NO.:4

引物对五：

5F：SEQ ID NO.:7；5R：SEQ ID NO.:8

引物对六：