[发明专利]提高植物转化效率的多个转化增强子序列的应用

权利要求书

1.一种提高根瘤菌介导的植物转化效率的方法，其包括：用根瘤菌转化植物细胞，所述根瘤菌包含含有至少一个来自根瘤农杆菌的T-DNA边界序列和与所述T-DNA边界序列可操作地连接的转化增强子序列的植物转化载体，其中所述转化增强子序列包含六个或更多个拷贝的SEQ ID NO:6或六个或更多个拷贝的SEQ ID NO:6的全长互补序列。

2.权利要求1的方法，其中所述转化增强子序列位于T-DNA右边界(RB)序列的近端。

3.权利要求2的方法，其中所述转化增强子序列来自发根农杆菌的Ri质粒。

4.权利要求1的方法，其中所述根瘤菌介导的转化是农杆菌属介导的转化。

5.权利要求1的方法，其中所述根瘤菌介导的转化是农杆菌属、根瘤菌属、中华根瘤菌属、中间根瘤菌属或者慢生根瘤菌属介导的转化。

6.权利要求1的方法，其中所述植物细胞来自选自以下的植物：大豆、玉米、棉花、油菜、水稻、小麦、苜蓿、菜豆、花生、烟草、向日葵、大麦、甜菜、青花椰菜、甘蓝、胡萝卜、花椰菜、芹菜、大白菜、黄瓜、茄子、韭葱、莴苣、甜瓜、燕麦、洋葱、豌豆、胡椒、马铃薯、西葫芦、萝卜、高粱、菠菜、南瓜、糖萝卜、西红柿和西瓜。

7.权利要求1的方法，其中所述转化增强子序列包含SEQ ID NO:11或SEQ ID NO:11的全长互补序列。

8.权利要求1的方法，其中所述植物细胞是玉米或大豆细胞。

9.权利要求1的方法，其中所述T-DNA边界序列包含1-18个拷贝的所述转化增强子序列。

10.权利要求1的方法，进一步包括从所述植物细胞再生转基因植物的步骤。

11.一种包含T-DNA边界序列的重组DNA构建体，所述T-DNA边界序列来自根瘤农杆菌且可操作地连接到转化增强子序列，所述转化增强子序列包含选自以下序列的一个或多个拷贝的SEQ ID NO:11、与全长SEQ ID NO:11互补的序列或它们的组合。

12.权利要求11的构建体，其中所述转化增强子序列包含所述序列的至少四个拷贝。

13.权利要求11的构建体，其中所述边界序列是右边界(RB)序列。

14.权利要求11的构建体，其中所述边界序列是左边界(LB)序列。

15.一种产生重组构建体的方法，包括：

将至少一个附加转化增强子序列引入到植物转化载体中，所述载体包含至少一个T-DNA边界区，且所述T-DNA边界区包括第一转化增强子序列，从而产生包含至少两个转化增强子序列的重组构建体，其中所述转化增强子序列与所述T-DNA边界区可操作地连接且包含一个或多个拷贝的SEQ ID NO:6和一个或多个拷贝的SEQ ID NO:20。

16.权利要求15的方法，其中所述边界区是右边界(RB)序列。

17.权利要求15的方法，其中所述边界区是左边界(LB)序列。

18.权利要求15的方法，还包括通过根瘤菌介导的转化用所述重组构建体转化植物细胞，其中所述根瘤菌对于所述植物细胞的转化是感受态的。

19.权利要求18的方法，其中所述根瘤菌介导的转化是农杆菌属介导的转化。