[发明专利]一种检测肺炎克雷伯氏菌的实时定量LAMP引物组及试剂盒

说明书

本发明公开一种检测肺炎克雷伯氏菌的实时定量LAMP引物组及试剂盒，所述LAMP引物组如SEQ ID NO：1~5所示；所述LAMP引物组用于制备检测肺炎克雷伯氏菌的LAMP扩增试剂盒，该试剂盒提供的LAMP检测方法具有高度的特异性和敏感性，重复性好，可信度高，特异性检测出肺炎克雷伯氏菌的特异性核苷酸片段，并且可对肺炎克雷伯氏菌拷贝数进行定量检测，快速准确的获得检测结果，为简便、快速地检测肺炎克雷伯氏菌带来便利，本发明解决了传统鉴别方法耗时费力等不足，适合基层使用，可作为肺炎克雷伯氏菌实验室快速检测鉴别的一种快速、准确、简便的检测工具。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体说是涉及一种快速并且可实时定量检测肺炎克雷伯氏菌的LAMP引物组及试剂盒。

背景技术

肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumonia, Kpn）为肠杆菌科克雷伯氏菌属的革兰氏阴性菌。可侵害人和动物的肠道、呼吸道等器官，从而可引起肺炎、肝脓肿、伤口感染和败血症等症状，是一种人兽共患病的病原。同时，牛感染肺炎克雷伯氏菌后，对多杀性巴氏杆菌、溶血性曼氏杆菌以及牛支原体等病原的易感性增加。目前，该病原体在全球范围内均有分布，在中国的分布流行同样十分广泛，造成巨大的经济损失，成为威胁牛养殖业的重要病原之一。

专利公布号为CN 104328174 A公开一种检测鼠肺炎克雷伯氏菌的LAMP 引物、试剂盒及方法，是通过肺炎克雷伯氏菌tyrB 基因序列设计LAMP 引物，建立适用于临床样品检测、特异性强、灵敏度高的鼠肺炎克雷伯氏菌可视化检测方法；可通过观测绿色荧光的有无快速准确的检测出肺炎克雷伯氏菌的存在，最低检测限为5.6 拷贝数/ 反应。但该方法存在速率不够高，并且不能实时定量检测的问题。

综上所述，急需建立一种可以快速、准确检测和鉴定肺炎克雷伯氏菌的方法具有重要的应用价值。

发明内容

本发明的目的是提供一种快捷准确检测鉴别肺炎克雷伯氏菌的方法，公开一种快速、实时定量检测肺炎克雷伯氏菌的LAMP引物组及应用。

为实现本发明目的所使用的技术方案为：

一种检测肺炎克雷伯氏菌的实时定量LAMP引物组，所述的LAMP引物组为SEQ IDNO：1~5所示的核苷酸序列；

所述SEQ ID NO：1、 SEQ ID NO：2为内引物FIP和BIP；

所述SEQ ID NO：3、 SEQ ID NO：4为外引物F3和B3；

所述SEQ ID NO：5为环引物LF。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中同源性为60%以上的序列。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中进行杂交的序列。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列进行转录的序列。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列进行优化截短的序列。

本发明还提供一种如以上所述的检测肺炎克雷伯氏菌的实时定量LAMP试剂盒，包括LAMP引物组、2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、RNase-Free water和肺炎克雷伯氏菌DNA模板 。

优选地，所述2×反应缓冲液由Buffer、dNTPs、Mg²⁺组成。