[发明专利]一种检测多杀性巴氏杆菌的实时定量LAMP引物组及试剂盒

说明书

本发明公开一种检测多杀性巴氏杆菌的实时定量LAMP引物组及试剂盒，所述LAMP引物组如SEQ ID NO：1~5所示；所述LAMP引物组用于制备检测多杀性巴氏杆菌的LAMP试剂盒，该试剂盒提供的LAMP检测方法具有高度的特异性和敏感性，重复性好，可信度高，特异性检测出多杀性巴氏杆菌的特异性核苷酸片段，并且可对多杀性巴氏杆菌拷贝数进行定量检测，快速准确的获得检测结果，为简便、快速地检测多杀性巴氏杆菌带来便利，本发明解决了传统鉴别方法耗时费力等不足，适合基层使用，可作为多杀性巴氏杆菌实验室快速检测鉴别的一种快速、准确、简便的检测工具。

技术领域

本发明涉及微生物检测技术领域，具体说是涉及一种快速并且可实时定量检测多杀性巴氏杆菌的LAMP引物组及试剂盒。

背景技术

多杀性巴氏杆菌是一种两段钝圆，中央微突的短杆菌或球杆菌，长0.6-2.5微米，宽0.25-0.6微米，不形成芽胞，不运动，无鞭毛，革兰氏染色阴性的需氧兼性厌氧菌。多杀性巴氏杆菌可诱发多种家畜、家禽发生巴氏杆菌病，猪、兔、黄牛、水牛、牦牛、鸡、鸭、鹅均易感，世界范围内呈地方性流行或散发性，热带地区严重，发病无明显季节性，但多发于冷热交替期，故9、10、11月份常见，给畜禽养殖业带来巨大经济损失。

专利公布号为CN108315401A公布一种检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的三重PCR引物、方法及试剂盒。其提供的试剂盒根据检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的高度保守的特异性序列设计三重PCR引物，建立了单管、同步检测猪链球菌2型、猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌的检测方法。该试剂盒首先需对病原的表型特征和生化指标进行鉴定，该鉴定方法费事肥力，并且PCR检测虽然特导性和敏感性都较高，但却需要昂贵的PCR仪、电泳槽等精密仪器，不适用于基层开展。

专利公布号为CN106811541A公布一种应用RPA-LFD现场快速检测多杀性巴氏杆菌的引物、探针级试剂盒。其包括正向引物序列SEQ ID NO.1、反向引物序列SEQ ID NO.2，探针序列SEQ ID NO.3，该试剂盒最低检测到6拷贝/反应的多杀性巴氏杆菌DNA。但该无法在试验过程实时定量的检测。

综上所述，急需建立一种可以快速、准确、实时定量检测和鉴定多杀性巴氏杆菌的方法。

发明内容

本发明的目的是提供一种快捷准确检测鉴别多杀性巴氏杆菌的方法，公开一种快速、实时定量检测多杀性巴氏杆菌的LAMP引物组及试剂盒。

为实现本发明目的所使用的技术方案为：

一种检测多杀性巴氏杆菌的实时定量LAMP引物组，所述的LAMP引物组为SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列；

所述SEQ ID NO：1、 SEQ ID NO：2为内引物FIP和BIP；

所述SEQ ID NO：3、 SEQ ID NO：4为外引物F3和B3；

所述SEQ ID NO：5为环引物LF。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中同源性为60%以上的序列。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列中进行杂交的序列。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列进行转录的序列。

优选地，所述的LAMP引物组具有与SEQ ID NO：1~5所示的核苷酸序列进行优化截短的序列。

本发明还提供一种如以上所述的检测多杀性巴氏杆菌的实时定量LAMP试剂盒，包括LAMP引物组、2×反应缓冲液、Bst DNA聚合酶、超纯水和多杀性巴氏杆菌DNA模板 。