[发明专利]单链DNA核酸适配体及其筛选方法与用途

说明书

本发明是一种单链DNA核酸适配体，属病原微生物检测技术领域。具体是用于幽门螺旋杆菌特异性检测的核酸适配体。本发明单链DNA核酸适配体能够高亲和性、高特异性结合幽门螺旋杆菌。本发明还公开了该核酸适配体的筛选方法与用途。本发明单链DNA核酸适配体具有80个碱基和特殊的二级结构，其对幽门螺旋杆菌菌体表面蛋白的亲和力达到26.48±5.72 nM。通过检测其对幽门螺旋杆菌的结合率、荧光强度和荧光显微成像确定它能特异性作用于幽门螺旋杆菌。

技术领域

本发明属于病原微生物检测技术领域，具体涉及一种可用于特异性检测幽门螺旋杆菌的单链DNA核酸适配体，本发明还公开了其筛选方法与用途。

背景技术

幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori）是一种能够高度适应人体胃部强酸环境的病原微生物，能够引起急性胃炎、十二指肠溃疡、胃溃疡甚至胃腺癌等疾病。据报道，全球大约有一半人口被幽门螺旋杆菌感染，其中发展中国家的感染率较高。胃癌是最难预后的癌症之一，而幽门螺旋杆菌是引起胃癌的最主要的病原菌。幽门螺旋杆菌被发现已有30年，但寻找对其有效的治疗与消除方法依旧是医学界的难题。

核酸适配体（Aptamer）是通过指数级富集的配体系统进化技术(SystematicEvolution of Ligands by Exponential Enrichment, SLEXE)筛选得到的小片段核苷酸序列。核酸适配体因其碱基排列不同从而形成独特的三维结构与相应靶标分子特异性结合。因免疫原性低、靶标特异性高、稳定性高、灵敏度高等优势，核酸适配体在分子生物学、医学、分子生物化学等诸多领域引起关注，成为极具潜力的新型分子探针。

目前，将适配体应用于细胞检测，肿瘤成像，菌体检测和蛋白分子检测方面的研究较多，但将适配体用于幽门螺旋杆菌检测的文章却鲜有报道，利用幽门螺旋杆菌菌体表面重组蛋白来筛选针对幽门螺旋杆菌菌体的适配体的研究更是未见报道。

发明内容

本发明的目的在于针对现有技术的不足，提供一种可以用于用于幽门螺旋杆菌快速检测的单链DNA核酸适配体。

本发明的另一个目的是提供所述核酸适配体的筛选方法。

本发明的再一个目的是提供所述核酸适配体的用途。

为实现上述发明目的，本发明提供如下技术方案。本发明是一种单链DNA核酸适配体，其特点是：其核苷酸序列如下所示：

5’-AGTGTGCTCTTCTCAGGTCTCGGCGCGGTTGTGGGTACCTAGGGTTGTTGTTGCTTCTCAGCAGTGTCTCAGCATACGCA-3’。

本发明还公开了一种如以上技术方案所述的的单链DNA核酸适配体的筛选方法，其特点是，

（1）合成含有80个碱基的单链DNA文库和PCR所需引物，序列如下：

文库序列：5’-AGTGTGCTCTTCTCAGGTCT-40N-GCAGTGTCTCAGCATACGCA-3’

正向引物（P1）：5’-AGTGTGCTCTTCTCAGGTCT-3’

反向引物（P2）：5’-TGCGTATGCTGAGACACTGC-3’

(2) 单链DNA文库和靶标蛋白的准备：用蛋白包被液稀释小牛血清白蛋白BSA和幽门螺旋杆菌菌体表面蛋白HP-Ag分别包被在酶联免疫结合板中；将单链DNA文库用结合缓冲液稀释，高温变性后立即冰浴；