[发明专利]一种单基因病全基因组永生基因库的构建

说明书

一种用于生物医学领域的单基因病全基因组永生基因库的构建，其特征在于，构建含新霉素抗性基因的pLXSN载体，进而构建SV40 LT‑pLXSN载体并转染sp2/0细胞，以G418筛选阳性克隆，获得永生化特性改良和新霉素抗性基因标记的sp2/0细胞，经与基因突变细胞融合，获得具有两亲代细胞遗传特性、对G418和HAT联合筛选不敏感、贮藏了基因突变细胞全基因组、能永久冻存并能在体外无限扩增的杂交瘤细胞株，将突变基因收藏于杂交瘤细胞株，又将杂交瘤细胞株收藏于杂交瘤细胞库，以及以杂交瘤细胞的无限繁殖而复制单基因病基因，由此建立单基因病全基因组永生基因库。

技术领域

本发明涉及生物医学领域的一种单基因病全基因组永生基因库的构建，主要用于遗传病全基因组的收藏和产业化制备，为临床、教学、科研、制药和诊断提供可再生利用的基因组。

背景技术

为了更好地开展发病机制、临床治疗和实验诊断等研究，已有越来越多的国内外机构专注于各种病例样本的收藏及其样本库的构建。

在美国、英国、日本和中国都已建有各种类型的细胞库，如美国的标准细胞库（ATCC）、人类遗传突变细胞库（HGMR）、细胞衰老细胞库（CAR）；英国的胚胎干细胞库；日本的乳牙干细胞研究库；中国的重要医学生物资源保藏库、中国不同民族永生细胞库、脐血干细胞库、肿瘤细胞库、长寿老人永生细胞库等。

近年来，世界各国开始关注各种基因库的构建，继美国的NCBI基因库、日本的DDBJ基因库和欧盟的EBI基因库之后，中国经国家发改委、卫生部、财政部等部委批复，于2011年开始构建全球第四个国家基因库，并于2016年开始运营，成为目前世界上最大的基因库，该基因库采用基因信息数据库和生物样本资源库相结合的模式，建立样本资源、生物信息数据处理、存储与管理系统网络，主要存储中国特有遗传资源、生物信息和基因数据，包括头发、牙齿、精子卵子、血液、组织、尿液、细胞、干细胞、个人遗传家系、医疗数据、植物资源、动物资源、种子等生命资源，作为国家公益性创新科研及产业基础设施项目，拟为疾病的前瞻性研究提供样本资源，为疾病的诊断、预测、个性化医疗奠定基础，以提高我国生命科学研究水平和国际影响力，促进我国生物产业的发展。

但各种现有基因库的特点在于，不是永生基因库，难以可再生利用基因库中的样本资源，基因库中收藏的样本用多少就少多少，在不断利用样本的同时需要不断收藏样本。虽然从现有基因库中取出的样本可通过聚合酶链反应（PCR）扩增，从而提高相应基因资源的利用效率，但PCR扩增对象为有限长度的特定DNA序列，所以从基因库中所取样本的其他DNA序列通常因在本次研究中用不上而被废弃，造成了资源浪费，所以对于其他DNA通常同样是不可再生性利用。而在实际工作中，各种基因病几乎都为单基因病，发病率通常为几千、几万、几十万甚至几百万、几千万分之一，病例样本很难获取，所以，必须研究一种全基因组永生基因库的构建方法，使所建基因库中收藏的样本资源可通过细胞水平的全基因组扩增，达到可再生利用。

据文献报道，1975年Kohler等将具有抗体产生基因的B淋巴细胞与具有无限扩增性能的骨髓瘤细胞在体外融合，得到兼具骨髓瘤细胞无限繁殖和B淋巴细胞分泌抗体的杂交瘤细胞株，其中来源于B淋巴细胞的抗体产生基因随着杂交瘤细胞株的繁殖而扩增，因被用于单克隆抗体的制备而获得诺贝尔奖。

本发明通过改造鼠sp2/0瘤细胞，并通过细胞融合将基因病细胞的全基因组移植鼠sp2/0瘤细胞，使之收藏于鼠sp2/0瘤细胞内并获得能随鼠sp2/0瘤细胞的无限繁殖而扩增以及能长期冻存于-196℃液氮的性能，以此建立一种全基因组永生基因库的构建方法，达到可再生利用遗传基因的目的。

发明内容

为了解决现有基因库基因资源的不可再生利用问题，本发明人提出了本发明。

本发明的目的是要提供一种单基因病全基因组永生基因库的构建方法，以收藏和可再生利用单基因病基因组资源。