[发明专利]一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方法

说明书

本发明提供了一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方法，包括以下步骤：采集未开放花蕾，低温预处理24h‑48h，消毒，接种在培养基上；培养基为MS培养基，添加蔗糖、琼脂、激素；花药愈伤组织诱导期间进行黑暗培养。本发明的方法愈伤组织起动早，诱导率高，愈伤组织体积大，质地紧密。本发明为桔梗花药培养、单倍体育种、诱变育种等提供了基础。

技术领域

本发明属于植物学领域，具体涉及一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方法。

背景技术

桔梗Platycodon grandiflorum ( Jacq. ) A. DC. 属于桔梗科、桔梗属多年生双子叶草本植物，为我国的大宗药材，需求量大，是一种药、食、赏兼用植物。桔梗根部入药，其主要活性成分是皂苷，具有镇咳、抗炎、降血压、降血糖、减肥、抗肿瘤、提高人体免疫力等广泛的药理活性。

桔梗主要采用种子或无性扦插繁殖，但种子繁殖存在生产周期长， 产量低，种子发芽率不高，扦插枝条成活率又很低，严重限制了生产的发展。

组织培养技术在桔梗品种改良、种质保存、快速繁殖、基因转移等多方面得到广泛应用。桔梗组织在离体培养条件下，体细胞染色体更易发生各种变异，基因突变的频率也大为提高，这极大丰富了桔梗遗传资源，为药用植物改良开辟了新的途径。利用组织培养快繁技术可为桔梗栽培提供足量优质种苗；另外开展桔梗组织培养技术的研究，还可为桔梗其他方面的研究提供各种符合要求的材料。桔梗的茎尖、茎段和叶片离体材料均可诱导分化再生植株。

李玉芬、弭晓菊利用组织培养技术对桔梗不同外植体根、茎、叶进行愈伤组织诱导及植株再生过程研究，成功地诱导桔梗产生愈伤组织并获得了分化苗。发现外植体根、茎、叶愈伤组织诱导的频率不同，并筛选出最佳的愈伤组织诱导的培养基及苗分化培养基。朱玉灵等对桔梗的茎尖、茎段、叶片进行离体培养和植株再生试验研究。舒娈、高山林的实验结果表明，桔梗试管苗可以较容易地诱导出愈伤组织，并且愈伤组织保持着较强的再分化能力。杨耀文、钱子刚等用上胚轴作为外植体进行桔梗组织培养的研究。向邓云以下胚珠、茎尖、茎段和根尖为外植体对桔梗愈伤组织诱导及不定芽形成进行了研究。结果表明在MS+ 2.4-D 3.0mg/L + 6-BA 0.2mg/L的培养基上，下胚轴愈伤组织可形成丛生芽，不定芽分化能力较强；根尖愈伤组织芽分化能力次之；茎尖和茎段愈伤组织无芽分化。

桔梗花属于两性花，据文献报道和套袋自交试验表明，在自然状态下桔梗的自交结实率低，结实主要靠异花授粉。桔梗的遗传育种研究进展缓慢，通过花药培养得到单倍体植株，再经染色体加倍得到纯合体，从中选出的优良纯系后代不分离,表现整齐一致,可缩短育种年限。在诱导频率较高时，单倍体能在植株上较充分地显现重组的配子类型，可提供新的遗传资源和选择材料。

愈伤组织是进行植物快速繁殖、原生质体制备、转基因研究中一个重要载体，可为其倍性育种、组培快繁、体细胞杂交、无性系变异以及遗传转化提供良好的试验材料，最终为桔梗的遗传改良提供重要基础。以往对桔梗不同外植体根、茎、叶进行愈伤组织诱导研究。桔梗花药大，数量多、开花期较长，为其进行花药培养提供了充分的材料，但国内外未见利用桔梗进行花药培养的相关报告。

发明内容

为解决现有技术的不足，本发明提供了一种利用桔梗花药培养诱导愈伤组织的方法 。

本发明采用以下技术方案：