[发明专利]一种淋巴瘤相关基因检测试剂盒及扩增子文库的构建方法

权利要求书

1.一种淋巴瘤相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述淋巴瘤相关基因检测试剂盒包括针对899个扩增子的引物组合，所述扩增子在染色体上的起始位置和终止位置如下表1所示。

2.根据权利要求1所述的淋巴瘤相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述引物组合的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.1798所示；

优选的，所述引物组合分装于引物池1和引物池2中；

更优选的，所述引物池1中分装有448对引物，所述引物池2中分装有451对引物。

3.根据权利要求1所述的淋巴瘤相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述淋巴瘤相关基因检测试剂盒还包括Index引物；优选的，所述Index引物的核苷酸序列如SEQ ID NO.1799～SEQ ID NO.1894所示。

4.根据权利要求1所述的淋巴瘤相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述淋巴瘤相关基因检测试剂盒还包括纯化buffer；

优选的，所述纯化buffer中含有NaCl、PEG8000和水；

更优选的，每升所述纯化buffer中含NaCl 146.25g、PEG8000 200ml和工艺用水800ml。

5.根据权利要求1所述的淋巴瘤相关基因检测试剂盒，其特征在于，所述淋巴瘤相关基因检测试剂盒还包括酶混合物；优选的，所述酶混合物中含有Taq酶和酶稀释液；更优选的，所述酶混合物中Taq酶的浓度为0.278U/μl。

6.一种用于检测淋巴瘤相关基因的引物组合，其特征在于，所述引物组合的核苷酸序列如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.1798所示。

7.一种扩增子文库的构建方法，其特征在于，至少包括以下步骤：

(1)第一轮PCR扩增：利用如SEQ ID NO.1～SEQ ID NO.1798所示的引物组合扩增所述扩增子，得到第一轮PCR反应产物；

(2)纯化所述第一轮多重PCR反应产物；优选磁珠纯化；

(3)第二轮PCR扩增：将纯化后的PCR反应产物与Index引物进行第2轮PCR反应，将所述Index引物引入到所述扩增子的两侧；优选的，所述Index引物SEQ ID NO.1799～SEQ IDNO.1894所示；

(4)纯化所述第二轮PCR反应产物，得到淋巴瘤相关基因的扩增子文库；优选磁珠纯化；

(5)对所述扩增子文库进行纯化、定量。

8.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，在步骤(1)中，第一轮PCR反应分为2个反应管，使用的引物分别为引物池1和引物池2；PCR反应体系中含有PCR反应液2μl、引物池2.4μl、模板DNA 7μl、酶混合物3.6μl，其中，模板DNA的DNA含量为50ng。

9.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，在步骤(1)中，第一轮PCR反应的条件为：先95℃条件下保温3分30秒，然后以98℃条件下20秒、60℃条件下8分钟为一个循环，共循环18次，最后72℃条件下保温5分钟；反应结束后，将含有引物池1的反应管的PCR产物7μl、含有引物池2的反应管的PCR产物13μl合并，得到所述第一轮多重PCR反应产物。

10.根据权利要求7所述的构建方法，其特征在于，在步骤(3)中，PCR反应体系中含有第一轮PCR纯化产物9.4μl、Index引物2μl、酶混合物3.6μl；

第二轮PCR反应的条件为：先95℃条件下保温3分30秒，然后以98℃条件下20秒、58℃条件下1分钟、72℃条件下30秒为一个循环，共循环10次，最后72℃条件下保温5分钟。