[发明专利]一种菌丝球的定量接种方法

权利要求书

1.一种菌丝球的定量接种方法，其特征在于：把PDA平板上的红曲霉孢子制备成孢子悬液，接种至装有不同体积的培养液的24深孔板中，30℃、200r/min发酵4d形成菌丝球，绘制培养液体积与菌丝球干重之间的标曲，根据标曲确定菌丝球的接种量；PDA培养基为：称取200g去皮切块的马铃薯，加600mL水煮20min，八层纱布过滤取汁，在马铃薯汁中加入20g葡萄糖、15~20g琼脂，煮沸后冷却定容至1L，摇匀分装121℃灭菌20min，临用时，将PDA培养基用微波炉溶解，52℃保温20min后于无菌超净台中倒平板，冷却凝固；孢子悬液浓度为10⁶CFU/mL；培养液配置方法为：味精22.33g，硫酸铵9.72g，可溶性淀粉45g，无水葡萄糖12.50g，磷酸二氢钾9.00g，一水合硫酸锰0.21g，七水合硫酸镁2.1g，加去离子水定容至1000mL，自然pH，121℃灭菌20min；干重测定方法，将孔板中每个孔的菌丝球分别转移至离心管中，4500r/min离心10min，弃上清，60℃烘干至恒重，将此重量扣去空管质量即为干重；标曲的绘制方法，24深孔板中每列4孔为同一组平行，每行6孔为对照，每行微孔板的培养基体积分别为1.2、2.4、3.6、4.8、6.0、7.2mL，孢子悬液接种量为5%；待发酵完成后，称干重，以培养基体积为横坐标，干重为纵坐标，绘制标准曲线；接种方法，预先确定菌丝球的接种量，根据标曲换算应在微孔板中加多少体积的培养液，培养后经过无菌纱布过滤，将菌丝球接种于发酵液即可。