[发明专利]一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用

说明书

本发明公开了一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用，属于医药技术领域。本发明以杆状病毒表达的RVFV糖蛋白Gn和Gc作为抗原，从一例裂谷热康复患者的PBMCs中筛选到可以结合RVFV糖蛋白Gn和Gc的记忆B细胞，且通过单一B细胞测序、体外中和以及体内保护等实验，鉴定出8株高效中和RVFV感染的Gn人源单克隆抗体以及一株Gc人源单克隆抗体。本发明的人源单克隆抗体具有非常高的体外中和活性(IC₅₀可低至1.93±0.6pM，达到pM级)，可以有效治疗被RVFV感染的小鼠，预防RVFV对小鼠的感染，具有极高的临床治疗和预防RVFV感染的应用价值。

技术领域

本发明涉及一种裂谷热病毒人源单克隆抗体及其应用，属于医药技术领域。

背景技术

裂谷热病毒(Rift Valley fever virus，RVFV)是严重威胁人类和动物健康的虫媒病毒之一，属于布尼亚病毒目(Bunyavirale)白细病毒科(Phenuiviridae)白蛉病毒属(Phlebovirus)，可引起人畜共患病裂谷热(Rift Valley fever，RVF)，致牲畜死亡和流产。其表面覆有囊膜及糖蛋白突起，由3段负链RNA构成病毒基因组(S、M和L)，其中，M片段编码表面糖蛋白Gn和Gc，且在Gn的5’端编码非结构蛋白(NSm)，而Gn和Gc是病毒的主要囊膜蛋白，是病毒进行入侵和膜融合的关键蛋白；其传播范围十分广，绵羊、山羊、牛、水牛、骆驼等家畜均可感染该病毒；其致死率十分高，尤其是年幼的动物，一旦感染，病死率接近100％。

人也会感染RVFV，且多数症状轻微，可自愈，但是，也有部分患者出现重症，其中，5-10％的患者的视网膜会产生退行性病变，重者可导致单眼或双眼永久性失明；1％的患者会出现出血热，其中，50％的患者会死亡；1％的患者会出现脑炎，出现此症状的患者虽死亡率不高，但通常会留下严重的后遗症，如偏瘫等。

就时间上来说，1930年，科学家Danbney等在肯尼亚大裂谷的一次绵羊疾病暴发调查中首次分离到RVFV，自此，人们发现RVF疫情会在动物和人类中定期暴发，造成重大损失。例如，1977-1978年，RVF疫情在埃及暴发，当时共计有20万人感染，其中包括18,000例重症患者及600例死亡病例；而自2000年到2018年6月，全球共向世界卫生组织(WHO)通报了4830例重症RVF病例，其中包括967例死亡病例，死亡率约为20.0％。

就地域上来说，通常，RVFV在非洲地区流行。但是，2000年9月，阿拉伯半岛(沙特阿拉伯和也门)也暴发了RVF疫情，这也是首个非洲以外地区报道该疫情；2016年，我国也出现一例输入病例，该患者从安哥拉返回中国。

就传播方式上来说，RVFV主要通过蚊虫叮咬传播。已知的可传播本病的蚊子种类多达30种，分布在北极以外的其它各个大陆，因此，RVFV继续向世界扩散的风险非常高。

目前，针对动物的RVFV感染的有效预防手段是疫苗。在兽用疫苗方面，肯尼亚和南非使用RVFV的减毒活疫苗，埃及和南非使用福尔马林灭活疫苗。通常，减毒活疫苗仅在绵羊免疫中有效，不能保护牛，且副作用较高，经常引起母羊流产；福尔马林灭活疫苗虽具有更高的安全性，但存在成本高、免疫不持久的问题。而其它种类疫苗仍在研究阶段，包括：DNA疫苗、基因工程改造株、VLPs等。

针对人群的RVFV感染的有效预防手段主要仍是通过免疫家畜、切断传染源。此外，非洲地区的高危人群可接种福尔马林灭活疫苗，但是由于成本问题，不可能大范围接种。人患病后，病毒唑(ribavirin)可能会有治疗效果，但目前临床数据不多。

因此，亟需研究出有效的RVFV感染治疗药物，尤其是可治愈重症患者的治疗。在这方面，抗体显示出巨大潜力。

发明内容

为解决上述问题，本发明对RVFV疫苗进行了研究，发现单独的Gn或是Gn与Gc一起的疫苗形式可有效产生RVFV的中和抗体，也就是说，针对Gn或Gc的抗体极有可能中和RVFV的感染，成为治疗RVFV感染的药物。