[发明专利]一种PEG修饰的重组人源化尿酸氧化酶的制备方法、纯化方法及其用途

权利要求书

1.一种编码重组人源化尿酸氧化酶蛋白的核酸分子，其特征在于:该核酸分子的序列如SEQ ID NO:3或SEQ ID NO：4所示。

2.一种表达重组人源化尿酸氧化酶蛋白的质粒载体，其特征在于：所述质粒载体包含权利要求1所述的编码重组人源化尿酸氧化酶蛋白的核酸分子。

3.一种基因工程菌，其特征在于：所述基因工程菌包含如权利要求2所述的质粒载体。

4.一种重组人源化尿酸氧化酶蛋白，其特征在于:所述重组人源化尿酸氧化酶蛋白通过权利要求1中的核酸分子在工程菌中翻译获得。

5.一种纯化如权利要求4所述的重组人源化尿酸氧化酶蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)如权利要求1所述的编码重组人源化尿酸氧化酶蛋白的核酸分子在工程菌的表达；(2)对步骤(1)中表达的工程菌进行破碎，收集类包涵体；(3)加入pH 10.3碳酸盐缓冲溶液，在4℃溶解类包涵体；(4)通过加入既可提高分子内氢键又可以降低电导的试剂调整溶液的pH和电导；(5)进行DEAE层析得到重组人源化尿酸氧化酶。

6.如权利要求5所述的纯化重组人源化尿酸氧化酶蛋白的方法，所述步骤(4)的具体操作如下：向缓冲溶液中加入甘油、PEG或蔗糖，然后加入NaHCO₃、CH₃COOH或HCl使缓冲液的pH降低到8.5-9.2。

7.一种纯化PEG修饰后的如权利要求4所述的重组人源化尿酸氧化酶蛋白的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)调整重组人源化尿酸氧化酶的浓度，加入PEG试剂进行PEG修饰；(2)将PEG修饰反应完全的溶液用50KD超滤离心管超滤替换缓体系，缓冲体系替换成的pH10.5-11.0的氯化铵-氨水缓冲液；(3)降低pH值至7.5-8.0进行洗脱；(4)提高氯化钠盐浓度至0.5-1.0M，将表面电荷较多的、结合较强的PEG-尿酸酶洗脱得到纯化的PEG修饰的重组人源化尿酸氧化酶蛋白。

8.一种PEG修饰后的重组人源化尿酸氧化酶，其特征在于：由权利要求1所述的编码重组人源化尿酸氧化酶蛋白的核酸分子在工程菌中表达，进而通过PEG修饰获得。

9.一种如权利要求8所述的PEG修饰后的重组人源化尿酸氧化酶在制备降低尿酸生物试剂上的应用。

10.一种如权利要求8所述的PEG修饰后的重组人源化尿酸氧化酶在制备缓解通风急性发作生物试剂上的应用。