[发明专利]一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒

说明书

本发明公开了一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒，试剂盒包括包被微球、生物素标记的检测抗体、链霉素‑R藻红蛋白、反应缓冲液和反应稀释液；其中，包被微球包括包被TIMP‑1捕获抗体的微球、包被MMP2捕获抗体的微球、包被MMP3捕获抗体的微球和包被MMP9捕获抗体的微球，且包被不同捕获抗体的微球具有不同的颜色编码；检测抗体包括TIMP‑1检测抗体、MMP2检测抗体、MMP3检测抗体和MMP9检测抗体；反应缓冲液为弱碱性的PBS缓冲液；稀释缓冲液为包括0.05wt％～0.15wt％BSA的PBS缓冲液，其pH值为7.0～7.5。采用本发明中的试剂盒，可以达到及时发现并准确诊断癫痫的目的。

技术领域

本发明属于医药生物技术领域，具体涉及一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒。

背景技术

癫痫是慢性反复发作性短暂脑功能失调综合征，以脑部神经元高度同步化异常放电引起反复痫性发作为特征。癫痫是神经系统常见疾病之一，患病率仅次于脑卒中。癫痫的发病率与年龄有关，一般认为1岁以内患病率最高，1～10岁以后逐渐降低。我国癫痫患者男女比例为1.15～1.7:1。

难治性癫痫病又称之为顽固性癫痫，通常指无中枢神经系统进行性疾病或占位性病变，但临床迁延，经2年以上正规抗癫痫治疗，试用主要抗癫痫药单独或合用，达到患者能耐受最大剂量，血药浓度达到有效范围，仍不能控制发作，且影响日常生活，方可确定为难治性癫痫，难治性癫痫约占癫痫病人的20％～30％。难治性癫痫病因繁多，大部分存在脑补病损，如海马硬化、脑外伤、肿瘤、结节性硬化和先天性发育异常等。快速且准确的诊断癫痫对临床医生针对患者采取相关的治疗措施或者决策具有重要意义。

LaFrance等人研究发现，TIMP-1在癫痫患者血清中的含量较正常人低，有望成为癫痫的血清biomarker，但其只是在小样本实验中有用，而在大样本癫痫患者血清中TIMP-1的水平与正常组之间没有显著性差异。另外，最近还有HSP70、S100B、NSE等指标在难治性癫痫患者血清水平较正常人高的报道，但均因检测方法不稳定、检测方法信噪比差等原因，造成结果重复性不好、可靠度不高等问题，而不能大规模的应用。MicroRNA作为癫痫诊断标志物可行性也有研究和报道，但由于样本量少、检测方法的特殊要求及费用昂贵等原因，其结果的可靠性、临床意义和推广性均有待于进一步考证。

癫痫患者脑组织及脑脊液中的MMPs含量明显高于正常人，MMPs是一个含锌离子的肽链内切酶家族，共分离出23个家族成员，编号分别为MMP1～23。MMPs的活性可以被金属蛋白酶组织抑制因子(TIMPs)调节，正常生理状态下，MMPs与TIMPs共同调控细胞外基质(ECM)的更新，维持血脑屏障、细胞膜及细胞的稳定，但是如果MMPs/TIMPs失衡，则中枢神经系统的结构、神经化学递质和影响细胞再生及死亡的渠道将被改变，从而产生慢性癫痫的基础。然而，国内外在MMPs作为诊断标志物的高水平研究尚十分匮乏。

发明内容

针对上述现有技术，本发明提供一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒，以达到及时发现并准确诊断癫痫的目的。

为了达到上述目的，本发明所采用的技术方案是：提供一种检测难治性癫痫病的液相芯片试剂盒，该试剂盒包括包括包被微球、生物素标记的检测抗体、链霉素、反应缓冲液和反应稀释液；其中，

包被微球包括包被TIMP-1捕获抗体的微球、包被MMP2捕获抗体的微球、包被MMP3捕获抗体的微球和包被MMP9捕获抗体的微球，每种微球的浓度均为3×10⁶～8×10⁶个/mL，且包被不同捕获抗体的微球具有不同的颜色编码；

检测抗体包括TIMP-1检测抗体、MMP2检测抗体、MMP3检测抗体和MMP9检测抗体，每种检测抗体的浓度均为0.08～0.12μg/mL；

反应缓冲液为pH为7.0～7.5的PBS缓冲液；