[发明专利]高纯度乌司他丁及其制备方法和含有乌司他丁的药物组合物有效
| 申请号： | 201910121125.2 | 申请日： | 2019-02-19 |
| 公开（公告）号： | CN109553679B | 公开（公告）日： | 2019-08-23 |
| 发明（设计）人： | 许文勤;宋建东;柯樱;王玥;李翰明 | 申请（专利权）人： | 上海医药集团股份有限公司;广东天普生化医药股份有限公司 |
| 主分类号： | C07K14/81 | 分类号： | C07K14/81;C07K1/36;C07K1/34;C07K1/30;C07K1/18;C07K1/16;A61K38/57;A61P37/04;A61P13/12;A61P39/06;A61P29/00 |
| 代理公司： | 暂无信息 | 代理人： | 暂无信息 |
| 地址： | 200000 上海市浦东新*** | 国省代码： | 上海;31 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 乌司他丁 制备 硫酸铵 预处理 人尿激肽原酶 阳离子交换柱 细菌内毒素 药物组合物 聚乙二醇 亚硝酸盐 药物活性 制备工艺 高纯度 凝胶柱 吸光度 重金属 尿液 收率 透析 保证 | ||
1.一种乌司他丁产品，其特征在于，所述乌司他丁浓度为10万单位/ml时，在405nm处的吸光度值不超过0.18，人尿激肽原酶的含量不超过0.0005PNAU，重金属含量不超过1.6μg/ml，细菌内毒素含量不超过6.0EU；
所述乌司他丁采用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳测定的分子量为38,769-40,312Da或采用高效液相色谱法测定的分子量为67,076-67,750Da；
其中，所述乌司他丁产品的制备方法，包括以下步骤：
(1)尿液中加入亚硝酸盐，调节pH，搅拌，硫酸铵溶液进行洗脱，洗脱液进行抽滤，保留滤饼；
(2)滤饼加水溶解，调节pH，加入聚乙二醇，过滤，沉淀物干燥；
(3)步骤(2)沉淀物加水溶解，透析，干燥，即得乌司他丁粗品；
(4)乌司他丁粗品加水溶解，过凝胶柱层析，蒸馏水洗脱，收集组分，超滤；
(5)步骤(4)样品加入阳离子交换层析柱上样，用盐酸洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，即得乌司他丁产品；
其中，所述步骤(4)中凝胶柱层析填料为葡聚糖凝胶G-75，所述步骤(5)中阳离子交换柱为732型阳离子交换树脂。
2.根据权利要求1所述的乌司他丁产品，其特征在于，所述乌司他丁浓度为10万单位/ml时，在405nm处的吸光度值不超过0.16，人尿激肽原酶的含量不超过0.0004PNAU，重金属含量不超过1.0μg/ml，细菌内毒素含量不超过5.0EU。
3.一种权利要求1或2所述乌司他丁产品的制备方法，包括以下步骤：
(1)尿液中加入亚硝酸盐，调节pH，搅拌，硫酸铵溶液进行洗脱，洗脱液进行抽滤，保留滤饼；
(2)滤饼加水溶解，调节pH，加入聚乙二醇，过滤，沉淀物干燥；
(3)步骤(2)沉淀物加水溶解，透析，干燥，即得乌司他丁粗品；
(4)乌司他丁粗品加水溶解，过凝胶柱层析，蒸馏水洗脱，收集组分，超滤；
(5)步骤(4)样品加入阳离子交换层析柱上样，用盐酸洗脱，收集洗脱液，冷冻干燥，即得乌司他丁产品；
其中，所述步骤(4)中凝胶柱层析填料为葡聚糖凝胶G-75，所述步骤(5)中阳离子交换柱为732型阳离子交换树脂。
4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中尿液与亚硝酸盐的重量比为1吨：13-16kg。
5.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(1)中硫酸铵溶液浓度为8-12％。
6.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(2)中滤饼加1-3倍水溶解，调节pH5.0-6.0，加入8-12倍聚乙二醇，搅拌20-40min，静置，板框过滤，沉淀物冷冻干燥。
7.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤(4)中凝胶柱层析洗脱速度为0.4-0.6ml/min。
8.一种药物组合物，其含权利要求1或2所述乌司他丁产品或权利要求3-7任一项所述制备方法制备得到的乌司他丁产品作为活性成分。
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