[发明专利]一种无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗及其生产方法

权利要求书

1.一种无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗，其特征在于该疫苗含有采用大肠埃希氏菌表达的重组产气荚膜梭菌β毒素蛋白；制苗用菌种为重组表达产气荚膜梭菌β毒素蛋白的大肠杆菌被命名为大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL/SUB株，该菌株已于2019年01月14日送交北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所中国菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号：CGMCC No.17164；该疫苗用于同时预防由B型和C型产气荚膜梭菌感染引起的疾病；

所述表达的重组产气荚膜梭菌β毒素蛋白与野生型产气荚膜梭菌β毒素成熟毒素相比，包含多个氨基酸的突变；在N端添加助溶蛋白和C端含有便于蛋白的纯化的标签。

2.如权利要求1所述无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗，其特征在于所述重组产气荚膜梭菌β毒素蛋白，与野生型产气荚膜梭菌β毒素成熟毒素相比，包含多个氨基酸的突变，优选的为以下4个氨基酸突变，分别为第212位精氨酸突变为谷氨酸，第268位的亮氨酸突变为甘氨酸，266位的酪氨酸和278位的色氨酸突变为丙氨酸。

3.如权利要求1所述无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗，其特征在于所述表达的重组产气荚膜梭菌β毒素蛋白，其基因序列经过密码子优化，并在N端添加的助溶蛋白，优选的为小分子泛素样修饰蛋白SUMO(Small ubiquitin-likemodifier)，更易于在大肠杆菌中实现高表达和可溶性表达。

4.如权利要求1所述无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗，其特征在于所述表达重组产气荚膜梭菌β毒素蛋白，其C端含有便于蛋白的纯化的标签优选为6组氨酸(6*His)标签，便于蛋白的纯化。

5.如权利要求1所述无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗，其特征在于所述表达的重组产气荚膜梭菌β毒素蛋白为无毒突变体，大大降低了疫苗生产过程中的生物安全风险。

6.如权利要求1所述无毒性产气荚膜梭菌β毒素基因工程疫苗，其特征在于其制备方法为：用所述表达产气荚膜梭菌β毒素重组蛋白的大肠埃希氏菌(Escherichia coli)BL/SUB(CGMCC No.17164)株作为疫苗生产菌株，经发酵培养、诱导表达、菌体破碎、可溶性抗原蛋白分离纯化后，加双相油佐剂混合制成。