[发明专利]牛结核病诊断标志物及其应用

说明书

本发明提供了牛结核病诊断标志物及其应用，本发明利用非靶向蛋白质组学技术筛选、靶向蛋白质组学技术验证获得了能够区分牛结核病阴、阳性的标志物，其为IL‑8、CRP。本发明提供的牛结核病诊断标志物能够鉴别待检牛是否为牛结核病阴、阳性及阳性结核病牛是否处于排菌期，所述诊断标志物可用于制备检测牛结核病的试剂盒或试剂，为牛结核病的诊断提供了新的检测靶点，有助于结核病牛的及时检测和淘汰，也为牛结核病的综合防控提供了保障。

技术领域

本发明涉及牛结核病诊断标志物及其在制备牛结核病诊断试剂盒中的应用。

背景技术

牛结核病(Bovine Tuberculosis)主要由结核分枝杆菌复合群(Mycobacteriumtuberculosis comples，MTBC)成员——牛分枝杆菌(M.bovis)感染引起的一种人兽共患慢性传染病。与结核分枝杆菌相比，牛分枝杆菌具有更广的宿主范围，其最容易感染牛，同时可以感染其他家畜、灵长目动物、猫、犬以及野生反刍动物等，还能通过吸入含菌气溶胶或食用未经巴氏消毒的牛奶传染给人，在人与动物、人与人之间传播。结核病牛将病原菌以气溶胶形式排泄到体外，含有牛分枝杆菌的气溶胶附着在草场、水槽等地方，健康动物吸入6～10个病菌即可引起感染，此外，一头结核乳腺炎奶牛产奶时会释放大量的牛分枝杆菌，足以污染100头健康牛生产的总奶量。研究显示人类免疫缺陷病毒(Human ImmunodeficiencyVirus，HIV)患者更容易共感染牛分枝杆菌，并且发展为活动性结核病，更容易将牛分枝杆菌传染给与其密切接触的人，结核病已经成为了杀死HIV患者的最重要的凶手。因此，牛结核病不仅危害养殖业的健康发展，更引起严重的公共卫生安全问题，威胁人民的健康和生命安全，该病的有效防控直接关系着人类健康。

结核菌素皮试试验(Tuberculin Skin Test，TST)是最早被用来诊断牛结核病方法，也是目前世界上应用最广泛、世界动物卫生组织(Office International DesEpizooties，OIE)推荐的检测牛结核病的标准方法。γ-干扰素释放试验(Interferongamma release assay,IGRA)可以作为结核菌素皮试试验的替代检测方法，被OIE推荐用于牛结核病检测。

目前，皮试试验和IFN-γ释放试验主要以牛结核菌素(PPD-B)作为刺激原，其生产过程需要牛分枝杆菌强毒株，存在散毒危险，与禽结核菌素(PPD-A)、环境分枝杆菌、BCG存在共同抗原，存在部分假结核阳性牛的结果，因其是多种蛋白、脂类和糖的混合物，定性定量困难，难以保持批次间的稳定性。CFP-10、ESAT-6等重组牛分枝杆菌特异性蛋白具有成份明确、易于质控、制备简单且无生物安全隐患的优势，研究显示以CFP-10和ESAT-6作为皮试试验或IFN-γ释放试验刺激原，能有特异性检测牛结核病，但其敏感性还有待进一步提高。尽管许多疾病可依靠检测血液中的抗原或抗体而得到有效的诊断，但结核病的血清学诊断仍是一个难点。目前世界上用于结核病血清学检测的抗原主要有PPD、MPB70、Ag85复合物、MPB83蛋白及多肽等。Redchuk等用MPT63和MPB83建立的间接ELISA检测方法可鉴别诊断牛分枝杆菌感染和环境分枝杆菌感染。血清学检测方法非常方便，但由于目前建立的牛结核病血清学诊断方法都未能达到有效的灵敏度和特异性，所以未被国际结核病研究组织推荐使用。目前已建立的皮试试验、IFN-γ释放试验和血清学检测方法均无法区分排菌期和非排菌期结核病牛。巢氏PCR检测方法能够用于检测鼻腔分泌物、肺泡灌洗液、奶中的牛分枝杆菌病原，研究显示23％～80％的结核病阳性牛的鼻拭子中可以检测到牛分枝杆菌病原，但是该方法对检测环境、技术和人员的要求比较高，难以在基层推广应用。因此，筛选结核病牛特别是排菌期牛的生物标志物，并建立相关的诊断方法，有助于结核病牛的及时检测和淘汰，利于我国牛结核病的综合防控。

发明内容

本发明的目的在于提供一种牛结核病诊断标志物，以鉴别结核病牛特别是排菌期的结核病牛。