[发明专利]转基因玉米MON89034品系定量检测试剂盒及数字PCR检测方法在审
申请号: | 201910121937.7 | 申请日: | 2019-02-18 |
公开(公告)号: | CN109735605A | 公开(公告)日: | 2019-05-10 |
发明(设计)人: | 梁文;刘刚;闻艳丽;李妍;杨镇州;罗超;王乐乐;李兰英;许丽 | 申请(专利权)人: | 上海市计量测试技术研究院(中国上海测试中心;华东国家计量测试中心;上海市计量器具强制检定中心) |
主分类号: | C12Q1/6851 | 分类号: | C12Q1/6851;C12N15/11 |
代理公司: | 上海助之鑫知识产权代理有限公司 31328 | 代理人: | 陈详 |
地址: | 200040 *** | 国省代码: | 上海;31 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 数字PCR 品系 转基因玉米 定量检测试剂盒 检测 特异引物 探针组 检测灵敏度 定量检测 内源基因 转基因 | ||
1.一种用于转基因玉米MON89034品系定量检测的PCR引物对组,其特征在于,所述引物对组包括第一引物对,所述第一引物对包括如SEQ ID NO.:1所示的正向引物;和,如SEQ IDNO.:2所示的反向引物。
2.如权利要求1所述的用于转基因玉米MON89034品系定量检测的PCR引物对组,其特征在于,所述引物对组还包括第二引物对,所述第二引物对包括如SEQ ID NO.:7所示的正向引物;和,如SEQ ID NO.:8所示的反向引物。
3.一种用于转基因玉米MON89034品系定量检测的探针组,其特征在于,所述探针组包括:如SEQ ID NO.:3所示的针对转基因玉米MON89034品系特异基因序列的探针。
4.如权利要求3所述的用于转基因玉米MON89034品系定量检测的探针组,其特征在于,所述探针组还包括:如SEQ ID NO.:9所示的针对内源基因Adh-1保守序列的特异性的探针。
5.一种用于转基因玉米MON89034品系定量检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒包括权利要求1所述的PCR引物对组。
6.如权利要求5所述的用于转基因玉米MON89034品系定量检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括权利要求3所述的探针组。
7.如权利要求5所述的用于转基因玉米MON89034品系定量检测的试剂盒,其特征在于,所述试剂盒还包括dPCR反应液,所述dPCR反应液包括选自下组的一种或多种组分:
热启动Taq酶、镁离子和dNTPs。
8.一种转基因玉米MON89034品系定量检测数字PCR方法,其特征在于,所述方法包括步骤:
(1)提供待检测样本,所述样本中含有转基因玉米DNA;
(2)制备dPCR反应体系,进行扩增反应;
其中,所述dPCR反应体系包括步骤(1)提供的待检测样本、权利要求1所述的引物对组、和权利要求3所述的探针组。
9.如权利要求8所述的方法,其特征在于,所述dPCR反应体系中各引物浓度为300nM-800nM;优选地为400nM-600nM。
10.权利要求1所述的引物对组、和权利要求3所述的探针组的用途,用于制备检测试剂盒,所述检测试剂盒用于转基因玉米MON89034品系定量检测。
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